广西猪jev c792分离株全基因序列的测定与分析及rt-lamp的建立与e基因抗原域的原核表达.pdf

广西猪JEVFC792分离株全基因序列的测定与分析及 RT-LAMP的建立与E基因抗原域的原核表达 摘要 流行性乙型脑炎(Japanese virus，JEV)引起的一种十分重 炎病毒(Japaneseencephalitis 要的人畜共患的急性传染病，其主要流行于亚洲的东部和东 南部以及澳大利亚等地区，其引起的死亡率可达20％以上。 5 根据世界卫生组织的统计，乙脑年发病人数已达3000例， 其中中国的发病人数占到了80％。JEV可感染猪，引起妊娠 母猪流产、公猪睾丸肿大和仔猪神经系统疾病，给养猪业造 成了巨大的损失。猪是JEV主要的储存和扩散宿主，因此对 猪感染乙脑的诊断与防制具有重要的公共卫生学意义。 SA1 首先，本研究以JEV 4为模板设计JEV特异性引物， 分7段扩增JEV广西分离株FC792全基因，经序列测定与拼 0977 接后得到FC792分离株全基因组序列。FC792株全长1 个核苷酸，其中5’非编码区有95个核苷酸，3’非编码区 0296个核苷酸，共编码3432 有586个核苷酸，开放阅读框含1 个氨基酸。核苷酸与氨基酸同源性分析发现FC792株与国内 外JEV代表毒株的核苷酸同源性为84．6％．99．7％，氨基酸同 I l4．1 1 源性为96．2％．99．4％。其中与SA 株核苷酸同源性分别为99．7％和99．6％，氨基酸同源性分别 l4．1 型，且与YUNNAN0901和SA4．2株的遗传进化关系最 为接近。FC792株与YUNNAN0901株核苷酸的差异率仅为 o．45％，氨基酸差异率为O．76％，结构蛋白含有5个氨基酸的 差异。 其次，本研究建立了JEVRT-LAMP检测方法，并进行 了反应体系和反应条件的优化，灵敏度实验表明本研究建立 的JEV 法检出率的符合率为90．9％。而且反应结束后可以通过添加 化学发光剂进行可视化观察，大大缩短了检测时间。 第三，克隆出JEVFC792株包含E基因抗原域I和抗原 明重组蛋白Ea具有抗原性，纯化复性重组蛋白Ea，免疫小 鼠2次，间隔1周，二免一周后眼球采血、分离血清，经包 原性；ELSIA检测为阳性的小鼠血清进行病毒的中和试验， 结果表明免疫组小鼠血清具有中和JEV的能力，中和抗体效 价为1：70，说明Ea具有较好的免疫原性。 II 关键词：乙型脑炎RT-LAMP全基因组序列测定与分析 E基因免疫原性 III GENOME AND ANALYSISOFPIG旭V SEQUENCING GUANGXIISOLATESTRAIN THE METHODTHE OF RT-LAMP,AND EⅫRESSIONT髓EGENEOFFC792STRAIN ABSTRACT acuteinfections Japaneseencephalitis(厄)is caused byJEV，andit’Soneofmost de