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应用RNAi技术干扰 禽呼肠孤病毒的研究 摘要 禽呼肠孤病毒(ARC)是呼肠孤病毒属的成员。ARV广泛存在于鸡、火鸡 及其它禽类。由趾W引起鸡的各种疾病逐渐被认识，如：鸡病毒性关节炎、 腱鞘炎、鸡的矮小综合症、呼吸道病、肠道疾病、呼吸障碍综合症和骨质 疏松等。ARV感染呈越来越普遍的趋势，尤其对肉鸡饲养业，所造成的损 失逐年增加。目前，未见关于治疗ARV感染较好的药物和治疗方法报道。 siRNA技术作为一种极具吸引力的治疗策略，现已被广泛应用于抗RNA病毒 感染的研究中。 RNA干扰(RNA transcripitionalgene 出极大的潜力，特别是抗病毒治疗和抗肿瘤方面。 达载体(short hairpin 表达载体的干扰效果，本研究构建了EGFP绿色荧光报告质粒，并建 Time 立了Real 因。 S173 1载体中， 3株oC、oNS基因，纯化后将二者分别克隆到pEGFP．N 体共转染鸡胚成纤维细胞的结果表明，6个干扰载体均在不同程度的干扰了 目的基因的表达。 Green 为评估干扰载体shRNA对病毒复制的影响，建立了SYBRI荧光定 基因分别设计了特异性引物，同时选择了l对扩增内参基因D．actin弓I物，将 定纯化后，梯度倍比稀释作为标准品，用于实时定量荧光PCR中oC、aNS 结果表明，特异性shRNA可以有效抑制ARV体外增殖。 RT．PCRRNAioCcNS 关键词：禽呼肠孤病毒Real．Time INHIBITIoNOFAIVANREOVIRUSREPLICATIONWITH RAN INTERFERENCETECHNOLOGY ABSTRACT Avian membersofOrthoreovirus viruses reovirus(ARV)are genus．These were discoveredin andotherkindsof flocks．Avian chicken，turkey poulty reovirushavebeenassociatedwitha ofdiseaseconditionsin variety poultry viral and diseases， includingarthritis，tenosynovitis，entericrespiratory andSOcalled myocarditis，hepatitisstunting／malabsorptionsyndrome． RNA that the ofmRNA is interference(RNAi)isprocess degradation induceddouble··strandedRNAina iscalled manner,which