应用scge和apd技术检测石油烃对粪海胆dna的损伤效应.pdf

中文摘要 摘要 现今国内外溢油事故频发，泄漏的石油对海洋生态环境造成了严重的污染。 本文以马粪海胆为试验对象，利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和随机扩增多态性 DNA标记技术(凡心D)检测石油烃对其DNA的损伤效应，分别从细胞水平和分 子水平研究石油烃对海洋生物的毒性效应，探讨这两种技术在海洋石油烃污染检 测中的可行性，为海洋生态环境污染早期预警与风险评价提供参考。 以04柴油梯度浓度和暴露天数为变量条件，利用SCGE技术，在细胞水平上 研究石油烃对马粪海胆DNA的损伤程度。结果发现，矿柴油浓度在50mg／L时， 马粪海胆的DNA出现了明显的彗星拖尾现象，说明04柴油浓度在50 mg／L时会对 马粪海胆的DNA造成一定的损伤。同时，研究发现在50 mg／L浓度下，暴露天数 与细胞受损率、彗尾DNA百分含量(％DNA∞与DNA平均迁移长度之间具有良好 的相关性。 以矿柴油梯度浓度和暴露天数为变量条件，利用黜心D技术，在分子水平上 研究石油烃对马粪海胆DNA的损伤程度。为了找到最佳的反应体系，筛选出扩增 效果最好的随机引物，得到更明显的实验效果并提供对照组数据，首先运用乳心D 技术对还未投毒的受试马粪海胆进行遗传多样性分析。通过分析找到了适合马粪 海胆进行黜垤D实验的最优反应体系：25此的RAPD反应体系中，含Taq酶0．2pL、 15条扩增效果好的随机引物，利用这些引物对27个马粪海胆的DNA进行扩增， 共扩增出504条条带，平均每个个体19条，扩增所得的条带显示，多态位点占 75．4％，个体之间的遗传距离为0．2189．0．5307，平均遗传距离为O．3254，可见，马 粪海胆个体之间遗传多样性还是不错的。然后对该马粪海胆投毒，这次运用凡垤D 技术对投毒后的马粪海胆进行DNA损伤的研究。结果发现，只有当矿柴油浓度为 50 mg，L时，扩增条带产生了明暗度的变化，其中由引物s49和S67扩增出的条带 变化尤为明显，说明石油烃对马粪海胆DNA造成了损伤，且其DNA存在着易损 伤位点，又因为它们出现明暗变化的时间不同，说明其易损伤位点的耐污性不同。 关键词：马粪海胆；石油烃；SCGE；l认PDlDNA损伤 英文摘要 ABSTRACT ’I-herearemore锄dmoreaccidentsof in leaksthewo订d petrolellmhydrocarbon serious totllem撕ne enVironment．nistakes today，causingpoIlution ecolo舀cal papcr test SCGE们dRAPDto the何绷fcP，lf，Dn岱p”MP砌l淞舔the object，using analySis tlle whichisc卸sed toseaIlrchinatt11ecelIularlevel d锄age bypetI．oleumhydrocarbon 锄d廿1emolecular the thesetwo inthe leVel，exploringfe嬲ibili哆of technologies detectionofmadne arcf打encefor pe们leumhydrocarbon