柞蚕及家蚕卵黄蛋白基因的克隆与序列分析.pdfVIP

摘要 本论文主要包括柞蚕卵黄原蛋白基因的克隆和序列分析，家蚕卵黄原蛋白基 因5’端侧翼区克隆及序列分析，以及对七种绢丝昆虫卵黄原蛋白一级结构的特 性分析。 柞蚕是吐丝结茧的经济昆虫，属于鳞翅目天蚕蛾科，有关卵黄原蛋白的研究 报道很多。本文根据已经解析出的柞蚕卵黄原蛋白cDNA序列设计特异性引物， 有9对引物从柞蚕基因组DNA中扩增出柞蚕卵黄原蛋白基因9个DNA片段， 经克隆、测序和分析后获得柞蚕卵黄原蛋白基因序列。结果表明，柞蚕卵黄原蛋 白基因包含6个外显子和5个内含予，外显子的大小分别为2258bp、205bp、 和795bp。和其它已解析的昆虫卵黄原蛋白基因比较可以得出，最大的不同是相 对于其他昆虫卵黄原蛋白基因在启始密码子ATG后31bp处有一个大的内含子， 而在柞蚕卵黄原蛋白基因中缺失，这是迄今发现例外的第一个昆虫卵黄原蛋白基 因。其它的内含子所在的位置相对保守，而大小则有些变化；外显子的大小则相 对比较保守。在编码区没有其它中断，根据柞蚕卵黄原蛋白基因的外显子序列， 六个外显子从起始密码ATG到终止密码子TAA共编码了一个具有1778个氨基 酸残基的多肽。本研究为柞蚕乃至昆虫与卵相关的研究和利用提供理论基础。 从家蚕品种95l×952基因组DNA中通过PCR方法扩增了家蚕卵黄原蛋白 基因5’侧翼区序列比较，发现有4处碱基发生变化。但转录起始位点，TATA 框，短回文序列等没有变化，为以后对家蚕卵黄原蛋白基因表达调控和开发转基 因家蚕的研究奠定了基础。 家蚕、天蚕、蓖麻蚕、柞蚕、野桑蚕、透目天蚕、樟蚕7种绢丝昆虫分别属 于鳞翅目的家蚕蛾科和天蚕蛾科的不同属。通过对7种绢丝昆虫卵黄原蛋白一级 结构保守序列如信号肽序列、多聚丝氨酸、糖基化位点等的比较和分析，进一步 根据氨基酸的同源性构建系统树，结果证明了7种绢丝昆虫的卵黄原蛋白的一级 结构在进化上具有很好的保守性，其中蓖麻蚕和樗蚕的亲缘关系最近，两蛾科之 间的野桑蚕和樟蚕亲缘关系最远。 关键词：柞蚕家蚕卵黄原蛋白基因克隆 ABSTRACT containscloneand of ofAntheraea This vitellogenin papermainly sequencing of mori and of Bombyx 5-flanking vitellogenin pernyi，cloningsequencing of characteristic insilk regulatoryregion，analysisvitellogenin primarysequence insects． insectswith and isoneofeconomic cocooning，which Antheraeapernyi spinning toSatumiidaein are researchabout of many vitellogenin belong Lepidoptera．There ’ are tocDNA Antheraea this according