柞蚕杆状病毒基组的初步研究及家蚕yellow基因家族的克隆和序列分析.pdfVIP

摘 要 分子生物学的发展和杆状病毒载体表达系统(baculovirus expression vector systems，BEVS)的改进与完善，为成功表达各种具有生物活性的有用 蛋白和疫苗提供了一条有效的途径。目前多种杆状病毒基因组全序列已被 测定，而柞蚕杆状病毒表达系统由于多角体蛋白基因启动子效率比较高、 表达量高，成本低，有其独特优点，因此我们对柞蚕杆状病毒基因组进行 了初步研究。采用随机克隆方法，建立柞蚕杆状病毒的质粒基因文库，通 过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析，获得了柞蚕杆状病毒的三个新基 因，并对其序列进行了分析。 晚期表达基因，其推定的ORF为1125 bp，共编码374个氨基酸，基因内 部有一个保守的糖基化位点、六个半胱氨酸残基和两个疏水区；耙一2和 口e．38基因都是极早期表达基因，其推定的开放阅读框分别编码295和302 个氨基酸，并且内部含有～个保守的锌指结构和亮氨酸拉链。 2核营酸和氨基酸同源性比较结果表明：柞蚕核型多角体病毒的odv．e56 基因与黄杉毒蛾多角体病毒最高，而与松树叶蜂多角体病毒同源性最低； ie一2和p8．38基因都与黄杉毒蛾多角体病毒的同源性较高，与家蚕的同源 性比较低。 3在分子进化上，柞蚕杆状病毒odv—e56基因可能存在两种进化方式：一 类以点突变为主，基因长度变化不明显，另～类突变以小片段的碱基增减 为特征；ie．2和口e．38基因则出现大片段缺失，是研究物种分子进化比较 典型的基因。 在家蚕EST文库中，许多学者发现了有关细胞凋亡基因、组织分化 基因、蛋白酶抑制剂、抗菌肽基因等许多己知功能EST，以及组织和时期 特异表达基因，是家蚕分子生物学研究的活跃领域。本文通过用果蝇 构建了家蚕yellow基因家族，并分析了其序列及组织表达分布。 检索到74条与其同源的家蚕EST序列，应用DNAstar、ClustalX程序进 行分类拼接，获得七个都具有部分MRJP保{抠的基因片段，组成一个基 VII 因家族，且与果蝇的yellow基因家族成员都有同源性故命名为家蚕yellow 基因家族(Bm．yellowfamily)。 2应用cDNA末端快速扩增的方法补全了其中六个家族成员 水信号肽。在家族遗传进化分析上可以明确得出，家蚕yeHow基因家族是 一单系群体，且基因问同源性比较低。 Bm-yellow3除了血淋巴中没有表达之外，在其它器官都有表达； Bm-yellow4除了中肠和丝腺和熟蚕期的马氏管没有表达之外，在其它组织 都有表达；Bin-yellow6只在头部、翅原基、体壁、性腺和熟蚕期的气管中 有表达。 关键词：蚕：杆状病毒；yellow：克隆；序列分析 VllI ABSTRACT Withthe ofmolecule the ofinsect development biology improvement baculovirus vector had all become expressionsystems(BEVS)，itefficiency to active andbacterins．The kinds expressproteins genomes approach ofmany ofbaculoviruswere theAntheraea already