环境内分泌干扰二噁英的细胞毒性作用机制研究.pdfVIP

中文摘要 环境内分泌干扰物二嗯英的细胞毒性作用机制研究 (中文摘要) 环境内分泌干扰物(EEDs)是我国广泛存在、危害效应十分严重的环境与食品 污染物。目前，EEDs已成为全世界广泛关注的安全卫生问题之一。二嗯英(Dioxin) 和多氯联苯类(PCBs)化合物是目前国际社会极为关注的持久性有机污染物(POPs) 与EEDs。由于它们广泛分布并共存于环境中，具有可生物蓄积、难以降解、远距离 迁移及高毒等特性，已成为环境毒理学研究的热点；2，3，7，8．四氯二苯并二嗯英 (TCDD)是二嗯英类物质中毒性最大、毒作用最为典型、研究中最具有代表性的 物质，被公认为世界最强的致癌物。它主要来源于垃圾焚烧，农药、化肥、除草剂 等含氯化合物的生产和使用。TCDD化学性质非常稳定，在环境中普遍存在，近年 来相继发生了数起有关二嗯英污染事件，世界各国都极为关注二嗯英对人类健康和 环境安全的潜在威胁。因此，对TCDD的研究已成为一个热点，对其作用机制有了 初步的认识，但对细胞的毒性作用机制尚不完全清楚，对其毒性作用的拮抗研究也 报道较少，致使临床上还未有有效的诊治措施。本研究从体内和体外两个方面研究 了TCDD的毒性作用及其机制，并就锌对TCDD产生毒性效应的保护作用进行了初 步探讨，旨在为进一步探索临床防治措施提供一定的理论和实验依据。本研究包括 二部分： 第一部分TCDD与PCBs联合作用对大鼠外周血淋巴细胞DNA的影响 本部分实验应用TCDD和Aroclor1254单独及联合染毒大鼠，采用碱性单细胞 响，并利用析因设计方差分析判定二者对所检测的毒理学终点是否存在联合作用， 步研究二嗯英与PCBs的联合毒性作用提供一定的毒理学依据。采用2×2析因设计 单独染毒组(10 1254lO d。末次染毒24h后，取 mg／kg+TCDDlO鸺慨)，每天灌胃染毒一次，连续灌胃6 外周血，分离淋巴细胞。采用碱性单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)检测外周血淋 DNA％)、尾长(Tail Length)、尾矩(TailMoment)．并利用析因方差分析判定TCDD DNA％、Tail 染毒组Tail Len昏h、TailMoment与对照组比较差异无统计学意义 DNA％、Tail Moment (矽0．05)；TCDD单独染毒组和联合染毒组TailLen舒h、Tail 第3页 中文摘要 与对照组比较差异显著(∥0．01)。析因分析结果表明，在本实验条件下，TCDD与 觚clor 1254联合作用对大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的影响为协同作用。 第二部分环境内分泌干扰物二嚼英的细胞毒性作用 本部分研究采用TCDD和氯化锌同时作用于HepG2细胞，通过检测细胞内活性 痒(ROS)、抗氧化物质的含量和抗氧化酶的活性、一些蛋白表达的变化及细胞凋亡 情况，探讨氧化损伤在TCDD所致的HepG2细胞毒性效应中的作用，并初步探讨了 锌对TCDD所致毒性效应的保护作用，为进一步探索临床防治措施提供理论基础。 h后。采用MTT 分别以不同浓度的TCDD和盈C12染毒HepG2细胞，细胞培养24 法检测细胞活力；荧光探针DCFH．DA法检测ROS：采用TBA法测定细胞中脂质过 含量、采用试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性；Hoecllst荧光探针检测 细胞凋亡情况；单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA完整性；WeStemBlot检测细胞 细胞色素P450 达水平。结果表明，TCDD可引起明显的细胞毒性效应，并呈明显的剂量．效应关系． 表现为：HepG2细胞活力受到明显抑制；各染毒组细胞内ROS的生成量明显高于对 DNA％)、尾长(Tail 能够引起HepG2细胞的DNA损