瓜子金皂苷己抑神经细胞缺血再灌注损伤及抗神经炎症作用的体外研究.pdfVIP

摘 要 缺血性脑血管病是临床上最常见的脑血管病，是严重危害人类健康与生存的主 要疾病之一。脑缺血再恢复血供后，往往会出现缺血再灌注（ischemia-reperfusion ， I/R ）损伤，造成更严重的脑机能障碍，脑缺血后强烈的炎症反应也是造成脑组织继 发性损伤的重要因素。因此，抗脑I/R 损伤已成为脑缺血治疗中的重点，积极寻找有 效的治疗药物以减轻脑I/R 损伤，是降低患者死亡率和致残率的重要手段。 瓜子金是我国民间常用中药，具有祛痰、镇静、抗炎和抗抑郁的功效。瓜子金 皂苷己（polygalasaponin F ，PGSF)是从瓜子金中提取的三萜皂苷单体化合物，研究 资料显示PGSF 对神经系统具有非常广泛的药理活性，但其对脑I/R 损伤影响的研究 资料鲜有报道。故本课题选择I/R 损伤和与之相关的神经炎症作为研究方向，旨在探 讨PGSF 对I/R 损伤的神经细胞的保护作用及其作用机制。 首先，本文采用MTT 比色法和ELISA 法从多个角度对PGSF 的药理活性进行 了初步筛选，结果表明PGSF 在体外去血清模型、H O 氧化应激模型、低糖低氧模 2 2 + 型、MPP 拟帕金森氏症模型中对PC12 细胞均具有显著的保护作用(P0.01, P0.05), 并可以抑制LPS 诱导的BV-2 小胶质细胞释放TNF-α 。 然后，采用 PC12 和原代皮层神经元建立物理性和化学性去氧两种氧糖剥夺/复 供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)模拟I/R 模型，应用MTT 法、显 微镜照相、Hoechst33342/PI 双染、流式细胞术方法，证明 10、1、0.1μmol/L 浓度的 PGSF 可提高OGD/R 损伤的神经细胞的存活率，改善细胞形态和PC12 细胞的细胞核 形态，减轻细胞膜通透性受损程度，降低细胞的晚期凋亡/坏死百分率，提示 PGSF 对 OGD/ R 损伤的神经细胞具有保护作用；进一步采用JC-1 荧光染色法、DCF-DA 荧光探针法及免疫印迹法证明PGSF 抗I/ R 损伤作用的机制可能与其维持细胞线粒体 膜电位、减少细胞内活性氧含量、增加受损伤细胞的Bcl-2/ Bax 蛋白比值、降低P53 蛋白及活性Caspase-3 裂解片段表达有关。 最后，建立了LPS 诱导BV-2 小胶质细胞神经炎症模型，从抗神经炎症的角度 探讨了PGSF 抗缺血再灌注损伤的作用机制。应用ELISA 法检测发现，PGSF 可显著 抑制BV-2 细胞释放TNF-α、IL-1β 和NO 的生成 (P0.01, P0.05) 。免疫印迹和逆转 录PCR 实验结果表明，PGSF 可显著抑制LPS 诱导的BV-2 细胞iNOS 和COX-2 的 蛋白和mRNA 的表达，减少TNF-α 和IL-1βmRNA 的表达，并可降低LPS 诱导的BV-2 细胞 TLR4mRNA 的表达水平，提示以上 PGSF 抗神经炎症的效应可能是通过阻断 TLR4 介导的信号转导通路实现的。应用LPS 刺激BV-2 小胶质细胞的条件培养基对 PC12 细胞造成损伤的模型中，PGSF 可显著提高PC12 细胞存活率，在体外试验中证 明了PGSF 可以通过抑制小胶质细胞的激活而抑制炎症对神经细胞的损伤。 综上所述，本研究首次在体外试验中证明瓜子金皂苷己对缺血再灌注损伤的神 经细胞具有明显的保护作用，并具有抗神经炎症的作用，此为PGSF 的合理应用及进 一步研究开发提供了重要的理论依据。 关键词：瓜子金皂苷己（PGSF) ；缺血再灌注(I/R) ；氧糖剥夺/复供(OGD/R) ；凋亡； 神经炎症；BV-2小胶质细胞；PC12细胞；原代皮层神经元 Antiischemia-reperfusion Injury in Neuronal Cells and Antineuroinflammation Effect of Polygalasaponin F in Vitro Abstract Ischemic cer