猪繁殖与呼吸综征病毒gp3蛋白结合肽的筛选与鉴定.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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猪繁殖与呼吸综征病毒gp3蛋白结合肽的筛选与鉴定.pdf

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猪繁殖与呼吸综征病毒gp3蛋白结合肽的筛选与鉴定

llUllI IIIIIIIIIIIIIIIIII IIIlUIIIUI Y2295571 mira 目录中文摘要……………………………………………………………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………．．II 1引言……………………………………………………………………………………一1 1．1猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)简介…………………………………………………一1 1．1．1病原学特性………………………………………………………………………．1 1．1．2流行病学…………………………………………………………………………一l 1．1．3临床表现…………………………………………………………………………．1 1．1．4传播途径…………………………………………………………………………．2 1．1．5预防和消灭………………………………………………………………………．3 1．2PRRSV GP3简介………………………………………………………………………3 1．2．1 GP3的功能及在病毒感染细胞过程中的位置……………………………………3 1．2．2 GP3蛋白的糖基化研究…………………………………………………………一4 1．2．3 GP3在新型疫苗发展中的作用……………………………………………………5 1．3噬菌体展示技术的研究进展…………………………………………………………5 1．3．1噬菌体展示技术的基本原理………………………………………………………6 1．3．2噬菌体展示技术的应用…………………………………………………………。6 1．3．3展望 ……………………………………………………………………………6 1．4研究目的与意义………………………………………………………………………8 2材料与方法……………………………………………………………………………11 2．1材料…………………………………………………………………………………．11 2．1．1实验动物………………………………………………………………………．．11 2．1．2菌种与载体……………………………………………………………………．．1l 2．1．3主要工具酶……………………………………………………………………．11 2．1．4标准参照物……………………………………………………………………一11 2．1．5主要试剂………………………………………………………………………．．1l 2．1．6仪器设备………………………………………………………………………．．12 2．2实验方法……………………………………………………………………………．12 2．2．1 ORF3基因PCR扩增……………………………………………………………12 2．2．2原核表达载体的构建……………………………………………………………13 2．2．3重组质粒的鉴定…………………………………………………………………16 2．2．4重组GST-GP3诱导表达…………………………………………………………17 2．2．5重组蛋白GST-GP3的纯化与复性………………………………………………18 2．2．6多克隆抗血清的制各……………………………………………………………19 2．2．7多克隆抗血清的鉴定……………………………………………………………19 2．2．8噬菌体随机十二肽库对靶蛋白的生物筛选……………………………………．20 东北农业大学农学硕士学位论文 2．2．9结合克隆的特征鉴定……………………………………………………………21 2．2．10所选多肽结合功能的检测……………………………………………………一23 2．2．11筛选出的噬菌体及其多肽的抗病毒试验………………………………………23 3结果………………………………………………………………………………………………………………．．25 3．1PGEX．6P．GP3重组质粒的建立与检测………………………