猪细小病毒pp2010株的分离及基因组演化分析.pdfVIP

摘要 摘 要 猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)引起的一种以母猪流产、胎儿死亡、胎儿畸形、 木乃伊化及弱胎为主要特征的猪的繁殖障碍性疾病。该病在世界范围内流行，严重地影响了 养猪业的发展。本研究对吉林地区一猪场的一批流产母猪进行了病料采集，在PK15细胞上 进行了病毒的分离，经盲传后，病毒可在PK一15细胞上产生明显的病变，经电镜观察和免疫 荧光鉴定，证明所分离到的病毒为PPV，将分离到的病毒命名为PPV2010。 根据GenBank上已经公布的PPV序列设计了5对特异性引物，每段引物所扩增的片段在 起始和末尾处相互重叠，得到的5个PCR产物，分别经胶回收后连接pMDl8-T载体，重组质 粒经酶切鉴定正确后测序，所得结果利用DNASTAR软件进行全长序列的拼接，将PPV2010全 长序列上传至GenBank，获得序列号dN872448。 再经Se—Al手工比对，利用ModelTest 3．7计算得到所有数据组的最适核苷酸替代模型均为 OTR+G+I。利用PAUP 4．0进行了系统发生树的构建。利用DNASTAR软件比较了各毒株间的核 组进行了分析，结果显示在PPV的进化过程中并没有发生重组事件。对PPV的MCCtree构建 的病毒为PPV进一步生物学研究提供了实验材料，同时对PPV的进化分歧时间得出了新的结 论。 关键词PPV；病毒分离；全基因组：序列测定；进化分析 ABSTRACT Isolationandevolutionof porcineparvovirus strainPPV201O Abstract Poreine diseaseiScaused iSa parvovirus by parvovirus(PPV)，and porcine obstructivediseasewiththemainfeatuI’esofSOW propagation abortion，fetaldeath， fetalmalformations．mummifiedandweakfetal ofPPVhas Pig．Worldwidespread affectedthe ofthe thiS developmentpigfarmingindustryseriously．Instudy，a numberoftissue were collectedfroma afterblind samples jilinpigfarm，and virus obviousCPEonthePK一15cellS．Electron passages，theproduced microscopy andimmunofluorescencethattheisolatedVirusiSPPV．whichwas analysiSproved asPPV2010． designate Five of tothePPV pairsspecificprimersdesigned according sequencepubl