猪细小病毒四型初步研究.pdfVIP

摘要 Parvovirus 猪细小病毒4型(Porcine 4,PPV4)属于细小病毒科，细小病毒亚科，博卡病毒 Type 属的新成员，于2009年由美国科学家Cheung等首次检测发现并报道。此后两年，许多科学家又检 测到其他型的博卡病毒，但相互间序列相似度很低。目前有关博卡病毒属研究较多的是主要引起 人的呼吸道和肠道疾病的人博卡病毒，而关于PPV4的研究还处于起步阶段，目前仅局限于流行病 学调查和病毒的近全序列测定分析，而与本研究相关的病毒分离，致病性及组织嗜性等研究仍处 于空自。本研究主要对PPV4这一新病毒的诊断方法、流行病学、感染性和功能蛋白表达等做了初 步研究。 尚未在我国出现。从2009年开始，在中国部分猪群检至IJPPV4，但检出率极低，仅为3．52％。但 从2010年开始，PPV4的检出阳性率逐年升高，2010年的检测率为27％，N20l1年则高达3l％。 进一步分析数据显示，PPV4具有一定的区域性：检出率最高的为天津、湖北和江苏等省。冬季和 一般不与其他常见猪病共同出现，检出PPV4阳性的猪都很少检出其他常见猪病病原。 通过克隆并测定了7个PPV4的全基因组序列，分析显示PPV4的基因组结构和博卡病毒属其他 全长与美国获得的PPV4近全长基本相一致，都是首尾连接的结构，但不同的毒株在连接部分存在 不同的缺失。序列进化分析显示PPV4与博卡病毒属的其他病毒以及与其他病毒的进化距离都相当 远。 PPV4动物攻毒实验结果显示PPV4在实验猪体内存在明显的消长曲线，在接毒8天之时感染猪 体内的PPV4 DNA拷贝数达到高峰，随后开始平缓的下降。组织嗜性分析显示PPV4几乎可以感染 猪的所有器官，但在肠道以及泌尿道内的含量要明显高于其他器官。病理解剖结果也佐证了这一 结果：感染猪的肠道肠系膜淋巴结明显肿大。将感染后转阳的试验猪的血清过滤，超速离心富集 后，进行电镜观察，20000倍视野下可见类似细小病毒大小的病毒粒子。 对PPV4的各个开放阅读框进行真核表达，以验证用于检测PPV4抗体的蛋白，研究发现PPV4 蛋白原核表达之时发现表达出的蛋白要远小于NS实际编码蛋白的大小，仅约26KD。最终纯化获 得的PPV4NS蛋白，将可用于以后临床样品血清中PPV4抗体监测。 关键词：猪细小病毒4型，流行病学调查，动物实验，蛋白表达 Abstract PPV4 to isanewmemberinBoca virus，which belongsParvoviridae，parvovirussubfamily,Boca wasfirstdetected in2009fromUSA．Sincethen scientistshavedetectedother virus．It by many Cheung areall ofPorcineBoca the similaritieswithPPV4 studies viruses，but verylow．Many types sequence haveshowedthathumanBoca causedhuman andintestinaldiseases．Butresearchon mainly respiratory virus thePPV4stillinits scientistsseveralnearfull ofthisnow