猪细小病毒的分鉴定及ns1vp2基因遗传进化分析.pdfVIP

猪细小病毒的分离鉴定及NSI／VP2基因遗传进化分析 摘要 猪细小病毒(Porcine 常常引起母猪不孕、流产、产死胎和木乃伊胎等。除此之外，该病毒还可引起新生 仔猪死亡及仔猪的皮炎和腹泻等症状。PPV在世界范围内普遍存在和流行，可感染 不同日龄猪群，其引起的疾病尤其是母猪繁殖障碍性疾病给世界养猪业造成了巨大 的经济损失。本研究首先建立了临床病料中PPV的PCR检测方法，对临床送检的 疑似PPV感染病料进行检测，然后将检测结果为阳性的病料开展病毒分离，并对获 得的8株病毒分离毒株进行了生物学特性研究，在此基础上对分离株NSl和VP2 基因进行测序，了解并分析PPV基因变异特点及其遗传演变规律。具体研究内容如 下： 1．猪细小病毒PCR检测方法的建立及应用 选取猪细小病毒NSl基因设计特异性引物，建立了猪细小病毒PCR检测方法， 试验证明该方法具有良好的特异性和敏感性，可以检测到最低含量为1．58pg的PPV 2．8株猪细小病毒的分离鉴定及生物学特性分析 将PCR检测结果为阳性的病料开展病毒分离，共分离到8株PPV，在此基础上 进行了分离毒株生物学特性的研究。HA试验结果表明8株病毒能在ST细胞中增值， 的抗原性最相近，GX，SX，HL与其它分离毒株间抗原性差异较大。 3．8株PPV分离病毒NSl基因和VP2基因序列的测定与分析 完成8株PPVNSl基因和VP2基因的克隆、测序。同源性比对分析发现不同分 离毒株之间的NSl和VP2基因相似性均在98．0％以上，表明PPVNSl和VP2基因 均具有较高的保守性；多重序列比对发现PPVNSl基因和VP2基因存在多处位点突 变，对这些位点所受选择压力．进行分析，发现VP2基因中多个突变位点处于正向选 择压力之下，可能对PPV适应生存环境的改变及其自身的进化具有重要意义。 4．PPV遗传进化分析 育树。结果显示：中国PPV分离株可分为四个亚群，本次试验分离到的病毒SX，JZ， JB，ZD，GX均属于亚群1，其中JB和ZD，SX和JZ进化关系较近，GX与其它4 株病毒进化关系较远；分离株DS和ZM属于亚群2，二者进化关系最近；分离株 HL属于亚群4，与德国分离株亲缘关系较近，可能代表了中国新发现的基因亚型。 关键词： 猪细小病毒；分离与鉴定； VP2结构蛋白；遗传进化分析 III Abstract Porcine cause serious parvovirus(PPV)can diseasesof reproductive swine。The clinical typlcal fire signsembryonic death，mummification，stillbirthsand delavedren】m to oestrus·Besides hasalsobeen that，PPV linkedtoskin lesiona11d dematitis occ岍ence in is in piglets·PPV popularmany affec