猪圆环病毒2型rf2基因的克隆与序列分析及其真核表达.pdfVIP

何乃珠：猪圆环病毒2型ORF2基冈的范隆1j序列分析及其真核表达 1 猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析及其真核表达 硕士生：何乃珠 导师：高崧教授 摘要 猪圆环病毒(Porcine PCV2有致病性，是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post—weaningmultisystemicwasting dermatitisand syndrome，PMWS)、猪皮炎与1肾病综合征(porcinenephropathysyndrome， kD，是病毒的主要结构 基因编码病毒的核衣壳蛋白Cap蛋白，蛋白的分子量大小约为30 们刺激机体产生的抗体没有交叉反应，因此ORF2蛋白在诊断及疫苗研究中具有重要意义， 是PCV2的研究热点。 1．依据从临床断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)死亡猪病料中分离且己进行基因 组测序的PCV2(SD一11株)毒株和本实验室保存的PCV2 DQl04422)的基因序列，分别设计合成一对引物，用于扩增ORF2全基因，并分别将其 克隆到pMDl8-T ORF2核苷酸及 两株PCV2ORF2序列与GenBank中公布的国内外10个不同毒株的PCV2 氨基酸序列进行同源性比较并绘制进化树。结果表明，SD．11毒株的ORF2基因与比较的 10个毒株的同源性均较低，其中核苷酸同源性在90．2％～93．2％之间，氨基酸同源性在 进化树分析发现，该毒株的ORF2基因形成了一个独立的分支，表明该毒株与所比较的10 个毒株的亲缘关系较远；XSC毒株与中国分离株09GDLB(GenBank登录号为 一个小分支，以上结果说明SD．11毒株及XSC毒株在我国的流行或与种猪的引进有关。 将PCV2 AY9090041毒株的同源性最高，推测XSC毒株为PCV2b基因型。 XSC毒株基因序列，分别设计合成 2．根据PCV2a分离株及GenBank公布的PCV2b reBacmid—ORF2b—Cap。 kD的特异性条带，表 免血清识别；SDS．PAGE与Westernblotting分析均可见大小约为30 f自J接免疫荧光法及噬斑法测定病毒滴度，并比较各个方法的优缺点，以期找到一种测定重 组杆状病毒滴度的较好方法。结果表明，终点稀释法和间接免疫荧光法多次重复结果较为 理想，而噬斑法容易出现假阳性及假阴性，且试验结果重复时差异较大。 关键词：猪圆环病毒2型，ORF2基因，序列分析，昆虫细胞，基因表达，重组杆状病毒 滴度 何乃珠：猪圆环：嚆毒2型ORF2基冈的克隆与序列分析及其真核表达 3 L auandseUenceuence 0tllethe0RF2KtI ene0IIF V Cloninaseq analysisanal)ofgg andits in expressioneukaryoticsystem Mastercandidate：NaizhuHe Gao Adviser：Prof．Song Abstract The membersofthe Circovirus，familyCircoviridae， porcinecircoviruses(