猪细小病毒vp蛋白亲和肽的筛选与鉴定.pdfVIP

摘 要 猪细小病毒是引起猪繁殖障碍的重要病原之一，该病广泛存在于世界各地并在大多数猪 场流行，给养猪业带来巨大的损失，因此猪细小病毒一直是猪病研究的热点之一。VP2蛋白 是PPV病毒粒子的主要衣壳蛋白，能刺激机体产生抗PPV中和抗体，且基因序列保守，其 表达的蛋白具有较强的免疫原性，故VP2蛋白在猪细小病毒诊断试剂及新型疫苗研究领域具 有重要价值。 一。 本研究根据GenBank发表的PPV BQ株的基因序列，设计一对引物，通过PCR扩增得 构建的重组质粒VP2．pET32a经IPTG诱导，在E．coli 结果显示，表达产物分子量为82KDa，与预期大小一致，主要以包涵体的形式存在。Western blot显示，该蛋白能与感染PPV猪的阳性血清发生特异性反应，说明该重组蛋白具有抗原性， 可以作为鉴别诊断用抗原。 噬菌体展示技术是一种靶蛋白配体筛选方法。本试验以VP2蛋白为靶分子，利用噬菌体 随机十二肽库，对VP2重组蛋白进行了五轮生物淘选。在第四轮筛选表达载体pET32a(+)的 标签蛋白，从第五轮洗脱物噬菌斑中随机挑取10个单克隆菌落，进行核酸序列的测定及多肽 序列的推导，其结果表明，对靶分子经过5轮筛选后，最终筛选出6种亲和力的十二肽。将 PPV和肽孵育1h后同步加入ST细胞这种方式有抑制病毒的作用，2号肽具有良好的生物学 活性，对病毒的抑制率远高于l号肽，1号肽抑制病毒的能力较弱，但二者混合后抑制能力 增强。本研究为寻找PPV受体奠定了基础，为今后对PPV的防治及多肽疫苗的研制开发提 供了一定的理论基础和试验依据。 关键词PPV；VP2蛋白；VP2多克隆抗体；噬菌体技术；肽活性鉴定 Abstract of S andIdentification creening Affinity VP2ProteinofPorcine to Peptides Virus Abstract Porcine failureinswine，Thevirusis reproductive ubiquitousamong parvovirus(PPV)causes thathavebeentested．TheVP2 of swine theworldandiSenzooticinmostherds protein throughout PPVisa structuralofvirusandhas VP2 isa major protein specificimmunogenicity．Thegene conserved intheviral wouldbeusedin expressedproduct diagnosis． sequence genome．The totheVP2 ofPPVstrain in of BQ GenBank,apair According genesequence published VP2consistsof174