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猪卵母细胞双向电泳分析方法的建立 摘要 本论文的研究内容是猪卵母细胞蛋白质组中双向电泳平台的建立和优 化以及卵母细胞成熟过程中蛋白质表达的差异性。论文共分三章，第一章 为文献综述，第二章和第三章为实验研究部分。 第二章研究目的是卵母细胞双向电泳平台的建立，并对裂解液的组成、 样品处理、上样方式、上样量、IPG胶条和SDS一聚丙烯酰胺电泳染色方法 等相关技术进行比较和优化，能够得到清晰的电泳图谱，为卵母细胞成熟 过程中蛋白表达差异-哇研究打下基础。先利用十二烷基磺酸钠一聚丙酰胺凝 性研究，发现成熟前后卵母细胞的电泳图谱基本相同。 ， 在熟练操作第二向的基础上进行建立和优化猪卵母细胞蛋自质组分析 所需的双向电泳及相关技术。以一步裂解法(8 mMTri S，70mM DTT)裂解超声后超 2％(v／v)IPG缓冲液(pH3一IO)，40 速离心来提取总蛋白，商品化13Gm固相pH胶条(pH3-10)等电聚焦为 V，6h、 第一向，采用主动水化上样，上样量为100∥g，银染聚焦程序为30 V SDS T=12．5％) 60V，6h、500 h、1000V，1h，BO 、7h。以 V，4 ．‘00 均一胶( t 的垂直电泳为第二向，采用通用的硝酸银染色程序，成功地得到了清晰的 猪卵母细胞双向电泳图谱。 第三章的研究目的分别对未成熟和成熟猪卵母细胞进行双向电泳，用 基础。采用第二章建立的双向电泳平台对成熟前后的去除卵丘细胞的卯母 谱进行比对分析，发现一张图谱上大约有800左右fj勺蛋白点，其中差异蛋白 组学可以用于卯母细胞的成熟的分子机制的研究，发生改变的这些差异蛋 白可能在卵母细胞发育过程中发挥作用，或是卵母细胞发育成熟的标志物。 有助于揭开“生命启动”之迷，更深一步的理解繁殖与发育的机理。 关键词：猪卵母细胞SDS—PAGE双向电泳蛋白质组学 】l l I MENSl ONALGEL ESTABLSHMENTOFTWO-D PORCI NEOOCYTE ELECTROPHORESI SFOR ABSTRACT This ofthe istoestablishand objective study of two—dimensional proteomiCS electrophoresis(2一DE)for gel invitro thedifferent oocyte maturation(IVM)andanalyzed thesisis theinVitromaturation．The expressionduring