猪及鼠兔的a型感流行病学和病毒学分析.pdf

浙江大学博士论文(2009年) 中文摘要 摘要 流感病毒(influenzavirus，IV)，引发流感等呼吸道疾病。目前，欧、美、 亚、非等世界各大洲均有流感的发生，是一种世界范围的呼吸道传染病。尤其甲 型H1N1和H5N1亚型流感目前已成为严重的公共卫生问题，对人类健康构成巨 大威胁。目前对于流感病毒的研究集中在其自然条件下的生态分布，在动物群体 中的循环，溯源问题和流行病学研究。本研究围绕流感病毒在哺乳动物猪、鼠兔 中的感染状况进行，取得以下实验结果：检测了2000年至2008年从浙江省各地 个流感亚型的血清学调查。其中H1亚型抗体阳性率4．84％，场阳性率39．47％： H3亚型阳性率0．19％，场阳性率5．26％，其它亚型阳性率从0至O．09％不等。研 究结果表明浙江省猪场存在的流感病毒主要流行亚型为H1和H3。其中部分血 清对H5／H6／H7／H9亚型血凝抑制效价达到23，临床判断为阴性，但这说明猪群 可能感染过这些亚型的流感病毒并在猪群中流行过。从2000年至2008年Hl亚 型抗体变化趋势看，流感的感染率呈现一定的规律性，出现了2006年和2001 年两个峰值，血清H1亚型抗体阳性率最高，结合中国在这两年中的两次全国范 围猪病疫情，推测出现了两次猪流感H1亚型的流行。 本研究从青海鸟岛，尕日拉，深河口，黑马河和泉湾采集82份鼠兔血清， 进行了H1．H13共13种亚型的流感病毒抗体检测。检测到H1和H5两种抗体， 而且存在两种抗体共存的现象，阳性率为8．54％。其中Hl单一阳性率23．17％， H5单一阳性率3．66％。说明鼠兔中至少存在此两种亚型的流感病毒感染。 2008年从浙江金华分离到一株H9N2亚型猪流感病毒， 连续性的碱性氨基酸插入，属低致病性流感病毒的基因特性，受体结合位点为 禽源流感的特征。NA基因与韩国2004年的猪流感分离株同源性较高，在颈部 无缺失，与其所在分支09-like特点一致。除NP基因外，其它基因均与韩国毒 株遗传距离很近，说明它们之间的亲缘关系很近，可能来自相同的祖先。 浙江大学博士论文(2009年) 中文摘要 自2007年4月至今，我们己先后从青海鸟岛、深河口、尕日拉、泉湾和黑 马河等地的野生鼠兔中分离到5株H5N1亚型禽流感病毒。通过反转录一聚合酶 链式反应分别扩增了5株鼠兔分离毒的全部片段，分别克隆测序，并与GenBank 己发表的相应基因序列进行比较分析，绘制进化树。结果表明：A／pika／BI／07毒 较近。HA序列分析显示，呈现两个进化方向，BI株属于类青海支而GRL、QW、 HMH和SHK毒株属于混合／越南这一分支。推导的HA氨基酸序列分析，裂解 位点均符合高致病性禽流感的分子特征(ERRRKKR／G)，第226位氨基酸是对禽 聚合酶2的627位氨基酸是亲哺乳动物类细胞的赖氨酸(Lysine，Lys，K)。 研究了鼠兔分离毒对鸡、兔和小鼠的致病力。通过静脉接种，测定该病毒对 H5N1毒株后 鸡的静脉内致病指数，为2．93．3，均为高致病力毒株。鸡在感染Pika 出现明显的临床症状，引起全身性感染，并导致感染鸡100％死亡，在各脏器的 I起小鼠体重 病毒滴度为1．52．6．3logloTCID50／0．1ml。感染小鼠后，除A／pika／BI／07 下降、死亡外，其它四株未引起小鼠死亡。兔在攻毒后未表现明显的临床症状， 体温呈现一过性升高，持续2．3天，体温最高升至41℃，随后恢复正常，病毒在 鼻甲骨中复制滴度1。12-1．6logloTCID5dO．1ml。 关键词：流感病毒；H5N1亚型；H9N2亚型；血清流行病学；致病性；遗传 演化。 III 浙江大学博士论文(2009年) Abstract Abstract Influenzacausedinflue