猪繁殖与呼吸综征病毒nsp4与病毒复制相关性研究.pdfVIP

摘要 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine and reproductiverespiratory and 吸综合征病毒(Porcine respiratorysyndrome reproductive 和仔猪的1种传染性疾病。该病毒属于动脉炎病毒科，为有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组 共有9个开放阅读框(Openreading protein, and transcfiptasecomplex,RTC)来完成病毒的复制和增殖。 酶复合体(Replicase 为了研究不同致病性PRRSV毒株Nsp4的酶动力学差异，本研究将PRRSVHuN4株NSp4 Blot分析显示 Glutathione．Sepharose4B蛋白纯化柱纯化获得了高纯度的重组蛋白Nsp4。Western 1．12连接位点)，通过仪器检 成的人工短肽Dabcyl．KTAYFQLE上GRHFE-Edans作为底物(含Nspl 测Nsp4切割底物产生荧光值的变化研究2个蛋白的酶动力学，结果显示2蛋白酶体外能够切割 4-0．009718mM，Kcat--0．21264-0．000569min-1：CH—la 人工短肽，H1lM株Nspa的Km=0．1431 1704-0．009223 4-0．009672 1．12 株Nspa的Km=O．1 mM，Kcat--0．3323min-Io说明体外水解Nspl 时，CH．1a株Nsp4的催化效率显著高于HuN4的(p0．05)。 Man荧光探针，建立了可以快速检测PRRSV的荧光定量方法。 核苷酸序列设计特异性引物和Taq 该方法在检测101～108拷贝／灶模板范围内有良好线性关系，能检测10拷贝／止的模板；而对猪 瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒和伪狂犬病毒基因组扩增结果均为阴性。实验组批内变异系数 h--一96 mRNA mRNA拷贝数。结果显示接毒后12h，Marc．145细胞上，HuN4 所收细胞Usp4 Nsp4 拷贝数是CH．1a的101·睁1·14倍；PAM上，HuN4Nsp4 h一-96 表明不论是在Marc．145细胞还是在PAM上，HuN4株在接毒后12h间mRNA拷贝数明显 高于CH．1a株(p0．01)． 通过以上研究得出由于HuN4株Nsp4基因的转录水平显著高于CH．1a Nsp4的切割效率，进 而导致体外HuN4的增殖速度快于CH．1a的。 关键字：猪繁殖与呼吸综合征病毒，3C样丝氨酸蛋白酶，Nsp4，酶动力学，荧光定量PCR Abstract infectiouswhichiscaused and an disease Porcine syndrome(PRRS)is by