蒙古牛骨形态发蛋白（bmps）基因克隆和组织表达研究.pdf

摘 要 它们对动物繁殖性能有重要作用，特别是对卵泡的生长发育和动物生殖功能起重要的 调节作用。故对BMPs及其受体的分子克隆和不同组织表达进行研究，以期确定BMPs 及其受体在牛不同生殖发育阶段所起的作用，并从基因角度上阐明不孕或多胎产生的 机制。本研究在其他哺乳动物(人、绵羊、猪、小鼠、鸡等)骨形态发生蛋白研究基础 上，首先采用RT．PCR技术克隆了与蒙古牛繁殖性状相关的四种基因，利用生物信息 学的方法对这四种基因的分子特征和结构进行了分析和预测，然后利用半定量 RT．PCR方法和原位杂交技术在mRNA水平上检测了四种基因在蒙古牛的卵巢．、子宫、 输卵管和肾脏组织的表达情况。通过上述方法获得如下试验结果： 1、采用RT．PCR方法从牛卵巢组织中扩增出四种与繁殖性状相关的转化生长因 和序列分析，四种基因序列与己知动物的相应序列有较高的同源性，符合TGF．13家 族成员的特征。 基因37端序列，其中BMPl5CDS区全长1 185bp，由两个外显子组成，编码394个氨基 ‘ 7 AY854957；克隆了牛GDF9基因保守区域，序列长264bp。 同源性，试验结果表明牛BMPl5基因核苷酸序列和绵羊的同源性为98．5％，与猪的同 源性为87．6％，与斑马鱼的同源性为29．1％；通过预测牛BMPl5蛋白质保守区域，发 异源结构域，牛BMPl5氨基酸序列存在4个功能位点。 牛BMPR-IB基因编码302氨基酸，此序列与人及禽类的核苷酸序列有很高的保守 性，根据牛BMPR-IBeDNA推测的氨基酸序列与已知绵羊、山羊、人、猴子、猪、 鸡等典型的真核生物氨基酸序列同源性均达到90％以上。 对牛BMP4基因序列分析表明，该基因eDNA序列包含有l 170bp编码区，3’端氨基 酸序列含有BMP家族固有特定位置的7个半胱氨酸，并与人、绵羊、小鼠、大鼠、狗 和鸡的核苷酸序列同源比对，发现它们的同源性分别为90．2％、94．2％、90．9％、90．4％、 85．4％和73．6％。 4、通过RT-PCR技术检测了四种基因的mRNA在牛卵巢、子宫、输卵管和肾脏组 织部位的表达情况。四种基因在牛卵巢、子宫、输卵管和肾脏组织中均有表达，只是 不同基因在不同组织中的表达丰度不同。 5、运用原位杂交技术检测了BMPl5基因的mRNA在卵巢中的表达情况。结果表 明，BMPl5mRNA在牛卵巢中有表达，且表达部位因卵泡所处发育阶段不同而不同： 在初级卵泡和次级卵泡早期，牛BMPl5 mRNA主要在卵泡的颗粒细胞中有杂交信号， 在次级卵泡晚期，BMPl5只在卵泡的透明带周围有辐射杂交信号。 关键词：蒙古牛；骨形态发生蛋白；生长分化因子；克隆；组织表达；半定量RT—PCR； 原位杂交 The and ofBone Tissue Cloning Expressionmorphogeneticproteins Genein Cattle Mongolian Abstract Bone differentiation proteins(BMPs)andgrowth morphogenetic the factor are membersof important transforminggrowth p(TGF—B)superfamily．They