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钙稳态在硒拮抗致lmh细胞内质网应激中的作用
目录 J㈣㈣㈣㈣
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目 录
1．1．1镉的污染与危害………………………………………………………………………1
1．3镉与氧化应激……………………………………………………………………………2
1．5镉与钙的相互作用………………………………………………………………………．4
1．5．1镉与钙的理化特性……………………………………………………………………4
1．5．3镉与钙的结合受体……………………………………………………………………5
2材料与方法……………………………………………………………………………………7
2．1试验材料与方法…………………………………………………………………………．7
2．2．1鸡CNX和CRT重组表达质粒构建…………………………………………………8
2．2．2鸡CNX和CRT重组蛋白表达………………………………………………………9
2．2．3鸡CNX和CRT多克隆抗体的制备…………………………………………………9
2．3．2
LMH细胞增殖生长曲线的测定方法………………………………………………．10
2．6．2内质网应激标志分子的引物设计…………………………………………………．．11
万方数据
东北农业大学农学硕士学位论义
2．6．3内质网应激标志分子表达的测定…………………………………………………．．12
2
2．7细胞自噬的测定…………………………………………………………………………1
2．7．1细胞自噬泡的观察…………………………………………………………………．12
2．7．2细胞自噬标志基因表达测定………………………………………………………．．12
2．8细胞内钙稳态的测定……………………………………………………………………13
3
2．8．1细胞内游离钙离子含量的测定……………………………………………………．．1
3
2．8．2细胞钙稳态调控相关基因表达的测定……………………………………………．．1
3
2．9内质网钙稳态调控蛋白CNX与CRT表达水平的测定………………………………．．1
3．0数据统计与分析…………………………………………………………………………13
3结果………………………………………………………………………………………………………………………．．14
3．1鸡CNX和CRT多克隆抗体的制备……………………………………………………14
3．1．1鸡肝脏组织中总RNA的提取与鉴定………………………………………………14
3．1．2鸡CNX和CRT基因扩增结果……………………………………………………．．14
3．1．3鸡CNX和CRT基因序列的测序结果………………………………………………14
3．1．4鸡CNX和CRT重组表达质粒的构建………………………………………………14
3．1．5融合蛋白的表达、鉴定与纯化……………………………………………………．．15
3．1．6多克隆抗体的制备与鉴定…………………………………………………………………16
3．2 7
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