遗传背景对小鼠倍体胚胎发育的影响.pdfVIP

摘要 多倍体现象与机体的正常发育是不相容的，哺乳动物胚胎在正常发育过程中存在 微弱几率(小鼠大约为0．1％)的自发多倍体现象，通常会导致流产或胎儿脊柱、骨 骼、面部畸形等发育缺陷。在生命科学研究中，四倍体胚胎可以作为研究机体发育的 有力工具，例如，用它来研究早期胎儿发育过程中调节细胞体积、数目以及分裂速率 的机制，也可以用它来改变双亲基因组在子代中的分配比例；更为重要的用途是通过 四倍体补偿作用获得完全由ES细胞发育丽来的个体，ES小鼠的获缛对基因功能的分 析、疾病动物模型的建立有十分重要的意义。为充分估计四倍体补偿作用，就必须对 因遗传背景引起的小鼠四倍体胚胎发育能力的不同进行研究。本实验通过电融合法由 多种遗传背景的小鼠分别获得了四倍体胚胎，并对其电融合效率、附植前和附植后发 育能力、与ES细胞构建嵌合胚的发育能力进行了比较。 不同遗传背景的小鼠四倍体胚胎的电融合效率存在显著差异：在融合电压为 显著高于近交系C57，ICR和BALB／e(P0．05)。 四倍体胚胎在体外的发育情况也受其遗传背景的影响：附植前发育阶段，在桑椹 后发育阶段，不同遗传背景的小鼠四倍体胚胎着床率间不存在显著差异(PO．05)， 远交系的小鼠四倍体胚胎得到5只发育至13．5dpc(dayspostcoitum，dpc)的胎儿，近交 系的4n小鼠胚胎无一发育至11．0dpc。 因为ES细胞的多能性会受到多次传代以及冻融的影响，因此需要在本实验室条 件下建立起ES细胞稳定的分离培养和鉴定体系。本实验以3．5代ICR小鼠胎儿成纤 维细胞作为饲养层，利用高糖DMEM作为基础培养基，同时添加15％的新生犊牛血 清、0．1mM的2．巯基乙醇、1％的非必需氨基酸、2ram的谷氨酰胺和青、链霉素各 J×129／Sv囊胚、49枚 C57BL／6Jxl29／Sv囊胚、38枚(C57BL／6JxDBA／2)F (C57BL／6JxC3H／HeJ)FI 株和3株ES细胞系，选择一株具有高度杂合背景的B6C3FlxB6D2FlES细胞系进行 核型分析、畸胎瘤实验后与ICR品系2n胚胎构建嵌合体并得到具有生殖系传递能力 的嵌合体小鼠(通过毛色判断)，证明此细胞系具有生殖系嵌合能力。 利用同一株具有生殖系嵌合能力的杂合背景ES细胞与不同遗传背景(ICRxlCR、 C57xC57、BALB／cx BALB／c、(B6D2Fl×B6D2F1)F2和(B6C3FIxB6D2FOF2)的四 和B6D2F2四倍体胚胎构建的3只嵌合体，移植其它嵌合胚的假孕鼠无一妊娠。以上 结果说明，远交系小鼠四倍体胚胎比近交系小鼠四倍体胚胎具有更好的发育能力。 关键词：小鼠四倍体胚胎；遗传背景；发育能力；ES细胞；电融合；四倍体补偿技 术；嵌合体 nflueneeofmouse onthe background genetic developmental of potentialtetraploidembryo Mastercandidate：W饥Xiaohui Supervisor：LiXiangyun Major：Animal and Genetics，BreedingReproduction Abstract is wiⅡlthenormal ofmost Polyploidy generallyincompatible development mammalian a there