转基因杂交大豆系特异性pcr检测技术研究.pdfVIP

摘要 摘 要 转基因杂交大豆是抗草苷膦转基因大豆与非转基因大豆杂交而成的一种新品系转基因 大豆，转入的外源基因明确，包含的外源基因元件为Cn^仍船启动子和NOS终止子，导入 的外源目的基因为C删．E尸S尸S基因，该基因对除草剂有耐受功能，不被除草剂杀死，农田 试验验证了具有耐除草剂作用。本实验通过扩增CaMV35S的旁侧序列，采用定性PCR和定 量PCR建立了转基因大豆的品系特异性检测技术，为我国转基因重大专项实施提供检测技术 支撑。 本实验采用染色体步行和巢式PCR方法扩增出转基因大豆CaMV35S插入的边界序列， 并根据边界序列设计品系特异性(event PCR)引物，建立了转基因大豆的品系特异 specific Green法检测外源基因拷贝数。结果如下： Green和Taqman探针定量检测系统，并采用SYBR 基因组序列同大豆基因组网站(Phytozome)数据库相比对，对转入的外源基因在染色体中 (2)根据获得的序列设计3对定性PCR引物，经过筛选和PCR条件优化，确定DDl．F／R 为最佳引物对，扩增片段为244bp。灵敏度验证证明当转基因大豆含量为0．1％时仍能检测出 特异性目的片段，结合特异性和重现性实验结果，证明该引物可以满足该转基因大豆品系的 品系特异性检测。 (3)根据转基因大豆CaMV35S左边界序列，设计引物和探针，采用SYBRGreen和 Green的检测限为0．05％， Waqman探针法对转基因大豆进行定量实验。实验结果证明SYBR Taqman探针的检测限为0．01％，灵敏度高于定性PCR。 (4)采用SYBR Green检测外源基因拷贝数，4份检测样品中，2个拷贝的为1份，3 个拷贝的为3份。 关键词转基因杂交大豆；染色体步行；品系特异性；拷贝数 Abstract Researchonthe of technigues detectionfor transgenichybridsoybean Abstract modified wasanewlineof the Geneticallyhybridsoybean transgenichybridsoybean,and containedCaMV35S CTP4-EPSPS．Inthis terminator,and exogenousgenes promoter,NOS study, event PCRdetectionfor wasestablished specific system hybridsoybean byobtaining transgenic theleftborder flankingsequence试c删3Ss． ChromosomeandnestedPCRwereusedtoobtainthe of sequence walking flanking CaMV35Sforevent and transgenichybrid