伪狂犬病tkˉeˉ基因缺失疫苗研究.pdf

． 盟堑垄堕!!：尘!望型堑堂皇童苎塑塑L————————————————一 摘 要 1．伪狂犬病病毒鄂A株TK／gE／gI。基因缺失疫苗的研制 virus，PrV)属疱疹病病毒科，Ⅱ疱疹病毒亚科猪疱疹病毒 ＼／伪狂犬病病毒(Pseudorabies I岔具有强烈的神经嗜性和潜伏感染性。胸苷激酶基因(TK)和糖蛋白基因gE、gI 均是PrV的主要毒力基因。TK基因与PrV在三叉神经中的增殖和潜伏感染有关，gE、 gI基因与PrV在神经元中的传递有关。 、班、gI后，突变株仍能在细胞培养物 Ea 上增殖，但PrV对动物的毒力可大大下 究首先用啦转移质粒pSPFZ与PrV 在X—gal存在下进行蓝斑筛选，挑取蓝 TK’基因组DNA共转染猪肾传代细胞IBRS-2 Ea 斑进行空斑纯化，空斑纯化三次后获得重组病毒PrV l进行酶切，回收5753bp的片段连接， 完整gE、gI基因的质粒pSKFB用＆“I和BamH I线性化的PrVEa ￡E基因BstEII位点共计1247bp的片断。将质粒pFBBS与EcoR Ea Ea Ea BamHI一7片断约6．6kb，而PrV TK一／gE／gI一突变株。Southem杂交结果显示，PrV 白质斑点杂交试验，以鼠抗班单克隆抗体为一抗，以羊抗鼠IgG为二抗，结果PrVEa Ea为阳性，证实gE／gI缺失后，突变株不能产 TK‘／gE／gI。及细胞对照均为阴性，而PrV 生相应的糖蛋白。 ＼ ， 在获得PrV EaTK‘／gE’／gI’突变株后，我们对其生物学特性进行了系统的研究。控斑 Ea所形成的空 试验表明，TK、gE及gI缺失后，突变株所形成的空斑小于野毒株PrV gE。／gI‘片段，表明该突变株遗传稳定，不会返强。用该突变株制成的冻干活疫苗接种仔 疫仔猪为班阳性；在母源抗体为班阴性情况下，仔猪仍为班阴性。表明gE缺失后， 免疫猪血清中不产生针对啦的抗体。普通ELISA试验表明，免疫仔猪的抗体水平显著 高于对照组。用几种gE缺失疫苗同时对新生仔猪进行滴鼻接种。结果，PrV EaTK‘／gE’／gI一 对仔猪较为安全。育肥猪二次免疫后中和抗体水平显著高于一次免疫。用冻干苗接种妊 Ea攻毒，结果未免疫母猪出现死胎、 娠二个月的母猪，4周后用107。TCID50的强毒PrV 疫组母猪窝产活仔数平均为10头，免疫组窝产活仔数平均为13头以上，免疫组母猪产 仔数显著高于未免疫组。用冻干苗接种小鼠、家兔、猫、狗、山羊、奶山羊，接种剂量 象，表明该疫苗具有极高的生物安全性。对免疫接种的小鼠、家兔用致死剂量的强毒 伪狂犬病TK‘IgE‘基因缺失疫苗研究 } PrvEa