我国羊泰勒虫的物学特性研究.pdf

摘 要 羊泰勒虫病(ovineand caprinetheileriosis)是由媒介蜱传播的由泰勒科泰勒属的原虫 寄生于绵羊和山羊巨噬细胞、淋巴细胞和红细胞内所引起的疾病的总称．泰勒虫与巴贝斯虫、无 浆体、可厥体可分别引起家畜的泰勒虫病．巴贝斯虫病、无浆体病及心水病，将这些疾病统称为 蜱传病(Tick-bornediseases)，在全世界每年造成约70亿美元的经济损失．羊泰勒虫病危害严 重，可引起羔羊和外地引进羊大量死亡，使慢性发病的山羊和绵羊发育变缓，产肉簧和产毛肇显 著下降，从而给养羊业造成重大经济损火．在我国，羊泰勒虫病是一种重要而常见的蜱传性原虫 病，主要分布于我国西部地区，包括甘肃，宁夏、内蒙古、青海、四川希I陕撕等省。然而，目前 国内对葶泰勒虫病的研究尚不全面。本项研究以我国分布的两种羊泰勒虫为主要研究对象．对其 生物学特性进行进一步的研究，主要研究结果如F：一 1．利用传播试验，确定青海血蜱和k角血蜱可以作为我国新定名的吕氏泰勒虫的传播媒介． 从感染吕氏泰勒虫的羊体饱血的青海血蜱幼蟀和J若蜱发育而来的若蜱和成蜱，能分别传播这种泰 勒虫给除脾绵羊；同时，从感染吕氏泰勒虫的羊体饱血的长角血蜱幼蜱和若蜱发育而来的艮角血 蟀若蜱和成蜱，也能分别传播这种泰勒虫给除脾绵羊。实验结果表明，吕氏泰勒虫至少能被2种 硬蜱—青海血蜱和欧角血蜱传播，传播方式为阶段性传播。 2．利用传播试验，确定青海血蜱和长角血蜱可以作为我国新定名的尤氏泰勒虫的传橘媒介。 从感染尤氏泰勒虫的羊体饱血的青海血蜱幼蜱和若蜱发育而来的若蜱和成蜱，能分别传播这种泰 勒虫给除脾和I未除脾绵羊；同时，从感染尤氏泰勒虫的羊体饱血的长角血蜱若蜱发育而来的成蜱· 能将这种泰勒虫传播给除脾和朱除脾绵羊；但是，从感染尤氏泰勒虫的羊体饱血的K角血蜱幼蜱 发育而来的若蜱，对尤氏泰勒虫的传播没有成功。实验表明，尤氏泰勒虫至少能被2种硬蜱—青 海血蜱和长角血蜱传播，传播方式为阶段性传播。 3．用液氮保存的吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫的虫血分别感染绵羊，待虫体出现厉，每日做血 液涂片、空气干燥、甲醇嘲定和姬姆萨染色，进行两种虫体的形态学观察。观察内容包括虫体形 态种类、各类虫体出现的先后次序．最高染虫率和染虫率高峰时各类虫体所Iq比例。结栗表明， 这两种泰勒虫的虫体胞浆呈浅蓝色，细胞核成紫色，形态类型主要包括圆形、卵圆形、针形、杆 状、三叶草形、十字架形、逗点形和不规则等多种形态。在整个病程中。以梨籽形、圆形(卵圆 形)、针形3类虫体占优势；而且这2个虫种在形态学上几乎没有明显差异． 4．对尤氏泰勒虫人1：感染的试验绵羊进行了病理学观察。结果显示：体表少毛部位、眼绪 膜、皮-卜脂肪和火网膜轻度黄染；淋巴结汞I肺脏肿胀，切面湿润多汁；心、肝、肺、肠道_手II瘤胃 表面可见针尖至柴粒人小出血点或出血斑。主要的组织学病变为淋巴结充血、出血及淋巴窦网状 内皮细胞增生：肺脏间质、网状细胞增生，肺泡隔增厚：肾小球内皮细胞，血管内皮细胞增生， 淋巴网状细胞灶状积累，甚至形成结节；心肌细胞变性坏死，染色不均；肠道肌层、粘膜层平¨J刊 有膜明显充血、出血：肝细胞颗粒变性和有散在细胞坏死，汇管区和小叶闭有淋巴网状细胞增生 瘤胃黏膜下层有散在性出血，肌内层见灶状出血． 5．建立了一种从感染有羊泰勒虫的羊血液细胞分离羊泰勒虫裂殖子的快速方法．用嗜水气 单孢菌产生的细胞毒素一溶血素Ah—l，裂解寄生有羊泰勒虫的红细胞，继而用Percoll密度梯度 离心分离和纯化羊泰勒虫裂殖子．光学显微镜检验表明．从感染羊泰勒虫的红细胞分离的裂殖子 仍然保持正常的虫体形态，并从宿主细胞成分中游离出来． 6．构建了吕氏泰勒虫cDNA表达文库，文库的重组率为100％，初级文库库容量约为1．0x106 lol RNAStabilization PFU，扩增文库滴度约为8．2xPFU／mL．本研究用RNAlater Reagent保存的 EcoR I／HindIII粘性末端的^ I／HindIII定向接头．将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoR extract对以上连接产物进行体外包装以形成完接的噬菌 SCREEN载体的两臂之间。用PhageMakc