抗鸡siga单隆抗体杂交瘤细胞株的建立.pdfVIP

摘 要 论文题目：抗鸡 SIgA 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 专 业： 基础兽医学 研 究 生： 王文强 指导教师： 龙塔 王选年 摘 要 家禽黏膜免疫作为动物机体抵抗病原感染的第一道免疫屏障有着重要的意 义。分泌型免疫球蛋白 A （SIgA ）做为黏膜免疫的效应因子，对病原菌在黏膜 表面黏附、增殖，启动免疫学生物活性，清除病原及保护机体抗感染等方面发挥 重要作用。 杂交瘤技术，是 20 世纪 70 年代到 80 年代诞生的生物高新技术，应用免疫 学的抗体产生原理和细胞杂交技术，获得单一抗原决定簇的高度均一的相应抗 体，该种抗体特异性好，敏感性高，来源稳定，容易标准化，与多克隆抗体相 比，具有显著的特点。 本研究首次以新鲜的鸡胆汁为材料，采用硫酸铵盐析法从鸡胆汁中粗提纯 鸡 SIgA ，应用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS）电泳鉴定和纯化 SIgA 重 链，再用纯化的鸡 SIgA 重链蛋白与等体积的弗氏完全佐剂充分混合颈背部皮下 多点注射 8 周龄雌性 Balb/c 小鼠，SIgA 50μg/只，隔 2 周后用弗氏不完全佐剂与 之混合，共免疫 2 次，超强免疫纯抗原以 100μg/只尾静脉和腹腔注射。3d 后取 小鼠脾细胞与 NS0 骨髓瘤细胞，在聚乙二醇(PEG-1500)作用下进行细胞融合， 当融合细胞长满细胞培养板时，用间接 ELISA 进行阳性杂交瘤的筛选，通过有 限稀释法 3 次克隆后，筛选出 1 株能够稳定分泌抗鸡 SIgA 单克隆抗体的杂交瘤 细胞株 5H9 。经间接 ELISA 检测验证，其细胞培养上清和腹水效价为 1:400- 1:800，1:16000，表明所获得的单克隆抗体具有和 SIgA 高度亲和力和特异性。6 个月内连续冻存和复苏 3 次，并连续传代 10 次后，抗鸡 SIgA 杂交瘤细胞株仍 能稳定分泌抗体，并制备出抗鸡 SIgA 单克隆抗体，为进一步研究家禽黏膜免疫 机制和鸡传染性疾病的早期诊断与防治提供了重要的技术基础。 关 键 词：鸡，胆汁，分泌型免疫球蛋白 A ，杂交瘤，单克隆抗体 论文类型：应用基础研究 I 摘要 Subject: The Establishment of Hybridoma Cell Lines Secreting Monoclonal Antibodies to Chicken SIgA Specialty: Basic Veterinary Medicine Name: Wang Wenqiang Supervisor: Long Ta Wang Xuannian ABSTRACT Mucosal imnunity of poultry is very important as the first defense barrier against infectious pathogens. The Secretory Immunoglubulin A(SIgA) is the effective factor of mucosal immunity in poultry, which has many functional attributes, serving to prevent adhering and multiplication of pathogens, priming biological activity in immunology