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捻转血矛线虫基因Hc38保守结构域所在部分的克隆、表达及免疫保护性试验 中文摘要 捻转血矛线虫(Haemonchus (Haemonchus)消化道线虫，感染牛、绵羊、山羊及其他反刍动物，引起动物贫血 及贫血综合症，严重的可致动物，特别是羔羊大批死亡，给畜牧业生产带来巨大 经济损失。目前，主要采用化学药物治疗该病，但药物残留严重，加之抗药性虫 株的出现和蔓延，使得化学治疗方法受到了严重挑战。应用免疫学方法防治该病 十分迫切和必要。 Hc38基因在捻转血矛线虫肠上皮微绒毛内高丰度表达，据推测它的表达产 物是一种重要的功能蛋白，与其吸血和免疫逃避机制有关。该基因表达产物的 l 10，该家族 96．512位氨基酸构成的保守结构域属于功能未知的蛋白家族pf049 目前有71条蛋白序列登录在GeneBank上，它们分属于45种生物，其中的14 种为人类或动物的重大血源性疫病病原或传播媒介。GenBank中注册了该抗原基 因的全序列，然而他的功能国内尚无相关资料报道。为此，作者开展了以下研究： 1．捻转血矛线虫Hc38保守结构域部分基因的克隆、鉴定及分析 根据GenBank发表的捻转血矛线虫Hc38基因序列，设计1对引物。以绵羊 捻转血矛线虫雌性成虫总RNA为模板，采用RT-PCR技术，扩增出大小约为 19一T载体，通过限制性内切酶NcoI 429bp的产物，回收目的片段并克隆入pMD 中AY749124序列同源性为99％。 2．捻转血矛线虫Hc38保守结构域部分基因的原核表达及重组蛋白特异性分析 Hc38保守结构域蛋自在DH5a中表达，且以包涵体形式存在。重组蛋白变性、 复性、纯化后，通过Westernblot测定具有免疫特异性。 3．捻转血矛线虫重组He38保守结构域部分基因抗原绵羊免疫保护性试脸 将重组He38保守结构域免疫绵羊后，ELISA检测结果表明血清抗体均在首 次免疫后12天达到较高水平，二免后第10天达到高峰。用30000条捻转血矛线 虫第三期幼虫攻击后，对不同组绵羊排出虫卵数、虫卵孵化率和成虫数进行统计 分析，结果表明：免疫组和对照组在虫卵孵化率、成虫计数等方面差异显著 (p0．05)，尤其是雄虫数减少明显。 关键词：绵羊：捻转血矛线虫；Hc38；原核表达；免疫试验 捻转血矛线虫基因Hc38保守结构域所在部分的克隆、表达及免疫保护性试验 ABSTRACT Haemonchuscontortusisan nematodethat tothe gastrointestinal important belongs of ruminantssuchas Haemonchus Trichostrongylidaefamily,whichparasitizes genus on cattleandSOon．The feedshost severe goats，sheep，and parasite blood，causing canbe lead economic anaemiawhich fatalto animals，whichsignificant lossof young helminthicwereusedfora timeandbeen for husbandryindustry．Many