斯氏艾美耳球虫ic-5基因的筛选、表达及重组蛋白免疫原性研究.pdfVIP

内容摘要 兔球虫稍是由艾美耳科的多种球虫所引起的种原虫性疚璃，对我州蓐兔业危害较重。 本研究对兰州地区兔球虫种类进ii了凋卉；应川无球虫兔和单卵囊分离技术对斯氏艾美耳球 菌斑原仲杂交技术从cDNA文库中筛选微线蛋白5(EsMIC．5)基冈片段；住毕赤酵母(Pichia pastorisJ中表达MIC-5基因，研究了重组蚩向的免疫原性。通过上述研究一1-要得剑以一F结论： 1．兰州地区存在14种兔艾美耳球虫，其中优势虫种为穿孔艾美耳球虫(21．2％)、无残 艾美耳球虫(10．0％)和斯氏艾美耳球虫(9．0％)。1≈月龄的幼兔感染率达100％，表明兔球 虫感染十分普遍。分离的E．stiedai兰州株具有较强的致病性。 2．构建的E．stiedai子孢子cDNA文库中含有约6．2Xxo的重组子，重组率为94．9％，插 入cDNA长度为500—1500bp。 3．从构建的E．stiedai子孢子cDNA文库中筛选出2个阳性克隆，并从该克隆中分离到大 小为1095 MIC-5基因3’端核菅酸 bp的cDNA片段。序列分析显示，该基因片段与E．tenella 的氨基酸序列中，存在4个Applc结构域。 4．在大肠杆菌中实现了EsMIC-5蛋白基因的表达，并用Ni离子柱纯化了重组蛋白。 5．成功扩增兔IFN-Y基冈，并构建了真核表达质粒pwⅨIFN．Y。通过脂质体转染BHK 细胞后，证实该真核表达质粒能正确表达IFN．Y。 6．实现了EsMIC-5基因在毕赤酵母中的分泌性表达。通过免疫小鼠证实，该重组蛋白具 有一定的免疫原性。 介导下肌肉注射免疫能有效地诱导机体产生较高水平的细胞免疫和体液免疫应答，并产生一 定的免疫保护作用。 关键词：斯氏艾美耳球虫，子孢子，cDNA文库，微线蛋白5，免疫原性 Abstract OccidiosisiS akindof diseasesinrabbitscausedcoccidianof sporozoal by has a threattorabbit inofir Eimeriidae，which posedgreat breedingindustrycountry．In in this studieson ofcoccidia ofrabbits paper，thefollowing investigation species lanzhou．isolationof ofEstiedaicoccidia-freerabbitand purespecie by singicoocyst ofcDNA of of and techniques。constructionlibrarysporozoitesE。stied口i．screening ofmicroneme to ofrecombinant 5(EsMIC．51 expression protein assayimmunogenicity MIG5were resultscarlbesummarizedasfollows： protein conducted．The coceidia ofEimeriawereobservedinthis were Firstly，14 species