波尔山羊-兔异克隆胚胎连续核移植及克隆胚移植研究.pdfVIP

摘要 本试验首先以经过接触抑制、新鲜消化的波尔山羊耳部成纤维细胞作为核供体，以 超排家兔卵母细胞为受体，构建波尔山羊．兔异种克隆胚，然后进行了异种克隆胚连续 核移植及异种克隆胚移植研究。旨在观察异种克隆胚(原代)与异种继代克隆胚早期发 育的差异性以及探索山羊．兔异种克隆胚在山羊体内继续发育的可能性，为发展动物克 隆技术提供理论和实践依据。 在山羊．兔异种克隆胚的连续核移植研究中，共构建原代重构卵858枚，经电融合 55枚， 后，获得重构胚440枚，重构卵融合率为51．3％，经体外培养后，获得桑椹胚l 囊胚45枚，囊胚率10．2％。随后，分别以获得的异种原代和异种继I代克隆桑椹胚卵 裂球为核供体移入去核的兔卵母细胞中，共构建继I代重构卯73枚，继II代重构卵20 枚。在原代重构胚和继代重构胚发育率比较研究中，共挑选出145枚原代重构卵与上述 73枚继I代重构卵、20枚继II代重构卵，经电融合后，进行体外共培养，所获得的重 构胚经过体外共培养后，卵裂率分别为72．2％、75．9％和28．9％；囊胚率分别为10％、 13．8％和0。试验结果表明：融合率方面，原代、继I及继II代重构卵之间无显著差异 Q)0．05)；早期胚胎发育率方面，继I代重构胚高于原代重构胚，但差异不显著(PO．05)， 相反，继II代却大大低于前两者，差异极为显著(P0．05)，并且在本试验中没有获得继 II代桑椹胚或囊胚；发育速度方面，继I代明显快于原代，两者发育至囊胚所需时问分 别为4～5d和5～6d，正常情况下相差1乏d，差异突出表现在体外培养后的第1个24h， 在此期间，继I代重构胚能发育到8～16细胞期，而原代重构胚却只能发育到4～8细胞 期，其至有些胚胎只能达到2细胞期，但在随后的培养时间内发育速度又无差异。 在克隆胚移植研究中，试验分原代胚移植组和继代胚移植组，共移植受体羊43头， 原代胚78枚，继代胚12枚，最终没有获得克隆后代。①原代移植组，移植克隆胚后， 毒6头受钵出羊终业发媾势维持1令月#A-l：，其孛l头达到60天，期间出现妊娠症状， 在其返情后腹腔镜探奁发现，一侧予宫体明姓比另一侧粗大。②继代胚移植组，有2头 受镕霹莘在移植菸黢螽30天才返落，捡溅斑涛肉孕鬻会璧，没有发魏持续援蹇现象。 试验结果表明：异种原代克隆胚移植后，在山羊体内形成早期着床，而继代克隆胚没有 形成着床。 关键调 冥秘壳隆 连续核移攘 疑l蠡移植 IV Abstract for cloned transfer and serialnucleartransfer inter’species The of embryo experiments onBoer cloned embryo were inter-species reconstructed conducted，basedgoat-rabbit embryo at donorandrabbbit ear cells useoffresh fibroblast as wasobtained go