水牛供体细胞组白乙酰化与核移植胚胎发育能力相关性的研究.pdfVIP

水牛供体细胞组蛋白乙酰化与核移植胚胎发育能力 相关性的研究 摘要 本研究主要探讨供体细胞的组蛋白乙酰化水平对水牛核移植效果的影 白乙酰化水平进行初步分析，探讨组蛋白乙酰化水平与胚胎发育能力的相 关性。 以水牛成纤维细胞为材料，建立了使用实时荧光定量PCR技术检测 应体系中，cDNA模板量为O．瓤L(相当于总RNA 引物O．5鲇L时，能高效获得特异性强的目的产物。 处理的供体细胞的HATl、HDAClmRNA变化情况进行了检测。结果发现： 0．15“M 理48h时可显著降低HDACl的mRNA水平(P0．05)。 。探讨了TSA处理供体细胞对其核移植效果的影响。结果显示，随着TSA TSA 处理浓度升高，核移植胚胎的卵裂率、囊胚率逐渐升高；当以0．1靴M 处理72h、O．瓤MTsA处理48h、O．嘶M 30-3％VS19％)。 对不同来源胚胎组蛋白第8位赖氨酸残基乙酰化水平的差异进行了初 步的分析。不同来源胚胎组蛋白乙酰化水平在不同阶段均发生动态变化： 胎、8．细胞期低于IvF胚胎外，其余各发育阶段均高于供体未作处理的核 移植胚胎、IⅥ7胚胎和PA胚胎；供体未作处理的核移植胚胎组蛋白乙酰化 水平在4．细胞期出现短暂的升高后又下降，随后变化模式与TSA处理组相 似；ⅣF胚胎的组蛋白乙酰化水平则是持续升高，在囊胚期达到最高；PA 胚胎的组蛋白乙酰化水平除4、8--tm胞期较低外，其余发育阶段相对稳定。 Green I实时荧光定量PCR 高质量的cDNA以及合适的PCR体系是SYBR 牛体细胞组蛋白乙酰化相关基因的表达水平；(4)核移植效率可熊旨供体 细胞的组蛋白乙酰化水平有关，适宜浓度的TSA培养处理水牛供体细胞一 定时间可提高其核移植后的胚胎发育畿力；(5)．胚胎发育能力与其组蛋白 的乙酰化水平密切相关，IVF胚胎的组蛋白乙酰化水平高于PA胚胎。 关键词：水牛供体细胞组蛋白乙酰化胚胎发育能力 mRNA水平 实时荧光定量PCR ON RELATIONSHIP STUDYTHE BETWEENDONOR AND HISTONEACETYLATIoNLEVEL CELLCHROA=“蜩阿N RECONSTRUCTEDBUFEALoEMBRYoS PoTENTL气L DEVELOPMENTAL ABSTRACT Effectofdonorcellchromatinhistone levelonnucleartransfer acetylation was the between efficiencyinvestigated，andrelationship wasalso histone embryosdevelopmentalpotential analyzedbycomparing level buffalo derivedfromnuclear acetylationamong embryos