水牛垂体催乳素prl）cdna的克隆与原核表达.pdfVIP

水牛垂体催乳素(PRL)cDNA的克隆与原核表达 摘 要 本论文研究内容是水牛垂体催乳素eDNA的克隆与原核表达。论文第一 部分包括第一章，为文献综述部分；第二部分包括第二章和第三章，为试 验部分。 水牛是我国南方重要的经济动物物种，有乳质好和耐粗饲等优点，不 足的是其繁殖力和泌乳能力远远低于奶牛。催乳素是一种由垂体前叶分泌 的多肽类激素，对催乳素的研究表明，它可以提高繁殖力和促进泌乳。本 试验的目的，就是通过催乳素基因cDNA的克隆与原核表达，对催乳素基因 的结构和功能进行初步探索和揭示，为提高水牛的繁殖力和泌乳能力打下 理论基础。 论文第二章的研究内容是水牛垂体催乳素基因的cDNA克隆和序列分 析。根据几种哺乳动物催乳素基因cDNA序列保守区，设计一对特异性引物， 序列，并重组到pMDl 推测编码氨基酸为229个，其中前19个氨基酸为信号肽。用NCB 高度的进化保守性，与牛属动物同源性高达98．4％，证明所克隆的序列为水 奠定了基础。 论文的第三章研究内容是水牛催乳素基因的原核表达，在得到的水牛 催乳素基因cDNA序列的基础上，重新设计带有酶切位点的引物，扩增去除 信号肽序列的催乳素基因目的片段，然后将该目的片段与高效表达载体 i I和HndⅢ双酶切，酶切产物用T4连接酶连接，连 pOE-30同时进行BamH 接后转化大肠杆菌DH5Q感受态细胞，成功构建了体外表达催乳素蛋白的原 PTG 5中，加入I 定为阳性的重组表达载体pQE-30-PRL转化到表达工程菌M1 带。分析表明表达的催乳素蛋白分布在不可溶蛋白部分，分子量在23kDa 左右，与理论分子量结果相符合。外源重组融合蛋白的成功表达为下一步 分离纯化目的蛋白做好了充分的准备，为进一步研究PRL基因的结构及功 能奠定了坚实的基础。 关键词：水牛催乳素基因cDNA克隆原核表达 cDNACLONl NGANDPROKARYOTl CEXPRESS_lONOF BUFFALOPl TUl TARYPROLACTI N GENE ABSTRACT ThisthesisstudiedcDNA and of cloningprokaryoticexpression iS intwo I includes pituitaryprolactingene．Itarrangedparts：Part isareviewof1iteratures：PartIIincludes 2and 1，which chapter whichfocusesonthe works． 3， experimental BuffaloiSoneofthemaineconomicalanimal insouthernChina， species which not can of alsocanbe onlyproducegoodqualitymiik，but rough andresist di ofbuffalois the ing sease．However，theshortage