水牛细胞核移植术的研究.pdfVIP

水牛细胞核移植技术的研究 摘要 本研究着重对水牛卯母细胞体细胞核移植的方法及影响因素进行了 探讨。 1．水牛卵母细胞体外成熟22h后，分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像 细胞为供体，采用带下注核电融合法核移植构建的重构胚的融合率、 分裂率和囊胚发育率，没有显著差异(PO．05)。由此说明，点击法 是一种较为简单、实用和有效的去核方法。 2．探讨了反向核移植应用于水牛体细胞核移植的效果。结果显示，反向 核移植可支持重构胚发育到囊胚，但其构建重构胚的效率极显著低于 合法(6．9％比15．9％，PO．05)。 3．探讨了水牛体细胞连续核移植的效果。连续核移植与原代核移植的分 裂率和囊胚率没有显著差异(PO．05)。说明连续核移植能否作为提 高水牛体细胞核移植效率的一种手段尚需进一步研究。 4．建立了水牛完整供体细胞胞质内注核的核移植方法。水牛完整供体细 胞胞质内注核法核移植构建重构胚的效率显著高于电融合法核移植 比71．8％，PO．01)，但二者的囊胚率和核移植的效率没有显著差异 整供体细胞胞质内注核法核移植可作为研究水牛体细胞核移植的一种 新方法。 5．探讨了水牛完整供体细胞胞质内注核后与激活前的时间间隔对核移植 效果的影响。研究发现，除了以卵丘细胞为供体细胞构建的重构胚在 激活前培养1．5h的分裂率显著低于其在激活前培养3h和5h外 胞为供体细胞构建的重构胚在激活前培养1．5h、3h和5h后的分裂率 都没有显著差异(PO．05)。卵丘细胞和胎儿成纤维细胞经核移植 后，其重构胚在激活前培养3h的囊胚发育率显著高于激活前培养 供体细胞在注核后的适宜激活时间是3h。 重构胚的分裂率和囊胚发育率都没有影响(PO．0．5)。 7．水牛IJ台：L成纤维细胞经4℃低温冷藏12b后用于核移植，对重构胚的 囊胚发育率没有影响(尸n∞)，表明供体细胞在一定的低温条件下 保存一定时间后可用于核移植。 关键词：水牛； 体细胞核移植； 点击法； 反向核移植： 连续核移 植； 完整供体细胞胞质内注核法 II STUDIESONTHE NUCLEARTRANSFER OF BUFE～LO ABSTRACT Methodsof buffalosomaticcell nuclear factors the of buffaloSCNTwere in affectingefficiency this investigated study． 1．Effectsofenucleation methodsonsomaticcellnuclear transferof buffalowere studied．Buffalo 22h maturatedinvitrowere oocytes enucleated and byblind-suck