猪繁殖与呼吸综征荧光定量pcr检测方法建立及其应用.pdfVIP

猪繁殖‘j呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用 摘要 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)以母猪发热、厌食、流产、死胎、产木乃伊胎和弱仔等繁 殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征，由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起，给全 球养猪业造成相当严重的经济损失，目前对于本病尚无有效的药物进行治疗，主要依靠疫 苗预防接种。因此利用体外增殖该病毒及研究其在猪体内的增殖规律显的尤为重要。本研 究建立了检测与诊断猪繁殖与呼吸综合征PCR方法及同时研究在Marc-145细胞中的增殖规 律和在猪体内的增殖规律及分布，旨在为PRRSV的流行病学、疫病预防等相关领域的研究 提供依据。主要研究内容如下： (一)设计并合成一对特异性引物，通过从病料中提取总RNA并逆转录为eDNA，PCR 品质粒，作为模板，且对反应的退火温度、引物浓度等进行优化，然后以优化的条件建立一种 能够快速、灵敏地检测PRRSV的SYBR．Green1实时荧光定量PCR诊断方法。结果显示 Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系，线性范围广，17--一36个循环都能测出； 稳定性、重复性好。用该方法对3份不同的组织样品进行了重复检测，结果表明，该方法具 有良好的重复性，可满足当前PRRS的诊断需