猪轮状病毒ns4基因原核与真核表达载体的构建及其表达研究.pdfVIP

中文摘要 轮状病毒(rotavirusRV)是仔猪腹泻的重要原因，仔猪感染RV后迅速发生腹泻， 严重者常因脱水而死亡，给畜牧业造成严重的危害。RV血清型众多，血清的免疫交 叉保护性低，研究新型疫苗已经成为防制RV腹泻的研究热点。最近的研究显示轮状 病毒非结构蛋白NSP4与RV免疫相关，有可能成为轮状病毒疫苗研制的候选基因。本 研究则从猪轮状病毒NSP4着手对其特性进行初步研究，主要内容如下： 1．猪轮状病毒NSP4基因的克隆及鉴定 点的上、下游引物，并利用反转录聚合酶链式反应(RT．PCR)从病毒基因组中获得NSP4 过细胞培养的OSU株产生了很大的变异，它与报道的OSU株核苷酸序列同源性为81 ％，氨基酸同源性为83％，主要变异区段集中在C末端。该毒株更趋向于人轮状病毒， 它与人轮状病毒G10株核苷酸同源性为93％，与氨基酸序列同源性为95％。 2．NSP4基因片段原核表达载体的构建及其表达研究 实验设计了一对引物扩增了去掉前端疏水区的300bp左右的NSP4基因片段，并将 表达并纯化的NSP4c蛋白和免疫小鼠获得的阳性抗体构建了检测NSP4抗体的间接 ELISA方法。 3．NSP4基因真核表达载体的构建及其表达研究 细胞。该载体含有绿色荧光蛋白，