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基于双巯基化合物和纳米金固定生物分子的研究 　　摘 要：利用自组装方法，将双巯基化合物通过形成金硫键修饰至金电极表面，再利用双巯基化合物的另一个-SH基，吸附纳米金颗粒形成纳米金的膜。运用循环伏安法对此修饰电极进行研究。发现双巯基化合物的最佳修饰时间为2小时；纳米金的最佳修饰速度为6小时；当扫描速度为100mv/s时固定抗体抗原的效果最好；而抗体抗原浓度为1：4时固定效果最佳。 　　关键词：纳米金 修饰电极 自组装 循环伏安法 　　一、引言 　　自组装单分子膜是使用含有各种活性官能团的分子，以化学键的形式与相应的基底（如Au、Ag、Cu、Pt、Si等）相互作用从而形成的自组装膜。目前研究最多的是巯基化合物在金电极表面的自组装及应用分析。由于金表面无自然氧化膜，稳定性好，而且与二硫化合物或硫醇形成的自组装体系具有良好的稳定性，因而以Au-S键为基础的自组装体系往往成为研究的首选体系。 　　分子自组装技术是80年代新兴的、基于分子自组装作用，在固体表面自然形成高度有序的分子层的方法。该技术具有制备方法简单、膜结构有序、性能稳定等优点，提供了在分子水平上方便地构造理想界面的手段，对实现优良功能材料的分子设计具有指导作用，在生物仿生、生物传感器、润滑、非线型光学等众多领域有广泛的应用前景，已成为当今学术界一项极有意义的研究课题。在众多自组装单分子膜种类中，硫醇类在金基底上的自组装因具有成膜条件较易控制、有序性强、吸附杂质少、选择性高等特点成为了研究最多和最具代表性的体系，在基础及应用研究领域都受到广泛重视。这些技术主要是针对自组装单分子膜形成后稳定状态下结构和性质的探识。但是只有了解和认识溶液中分子自组装的动态的物理和化学过程，研究自组装单分子膜有关的成膜过程的动态信息，才能更好地选择条件并控制膜的制备从而获得高质量自组装单分子膜。总之，自组装技术越来越显示出其不可比拟的优越性。自组装技术提供了分子水平上方便构造理想界面的手段，在润滑、防腐、催化、刻蚀、电子得失反应、分子器件、非线性光学众多领域有广泛的应用前景，从而成为近年来界面化学与材料化学领域研究的特点。 　　近年来，以纳米粒子构建各种纳米结构功能膜越来越受到人们的青睐。纳米尺寸的金颗粒具有比表面积大、吸附力强、生物相容性好等物理化学特性，它在材料学、电子学、生物医疗以及临床诊断等研究领域均有重要作用。巯基自组装膜是近年来发展的一种新型有机超薄膜，它基于硫原子与金属的强相互作用，成膜容易，制备简单，稳定性和有序性高，而且分子另一端可以带上不同的活性功能团以适用不同的修饰电极的要求。在免疫传感器的研究中，金电极表面上以硫醇分子的自组装应用较多，其固定途径主要是选择合适的功能团的硫醇进行自组装，然后通过活性功能团固定抗体来达到生物分子的固定。该文结合近些年来发展的纳米金技术，先在金电极的表面修饰一层双巯基化合物，再通过纳米金与双巯基化合物中的另一巯基的共价键作用，组装一层纳米金。然后利用纳米金比表面积大、对蛋白质的强亲和性实现羊抗人IgG抗体分子的固定。由于抗体自身带有巯基，而巯基与金之间存在疏水相互作用和形成硫-金键，金纳米颗粒具有良好的生物相容性及很强的表面吸附能力，由此形成的纳米金层用于固定免疫组分及抗体和抗原的应答反应，因而用作免疫实验中合适的传感界面。其基本原理分成三步：第一步金电极与双巯基化合物通过形成金-硫共价键将双巯基化合物修饰在金电极表面，第二步纳米金颗粒与双巯基化合物的另一巯基结合将纳米金修饰在金电极上，第三步上述过程形成的自组装膜包被抗体，第四步抗体与抗原发生免疫反应。 　　二、正文 　　1.金电极的预处理 　　将待修饰的金电极用5#金相砂纸打磨，然后用氧化铝研磨膏在BAS抛光布上抛光成镜面，在1：1硝酸溶液中浸泡30分钟，最后用乙醇和二次蒸馏水各超声清洗2次，每次2分钟，即可得到表面清洁的裸金电极。将处理好的金电极浸入90℃的Piranha溶液（由浓硫酸与双氧水以7：3的比例制成）中10min进行活化处理。再分别用二次蒸馏水和无水乙醇超声清洗2次（每次5min），处理后的电极浸入无水乙醇中备用。 　　2.双巯基化合物的修饰 　　将处理好的电极浸入装有双巯基化合物溶液的微型塑料小试管中，置于低温环境下，并且将此装置与周围环境隔离。（因为双巯基化合物易挥发影响修饰的效果）浸泡2个小时后，取出用二次蒸馏水清洗干净，再在水中超声10秒，除去物理吸附的双巯基化合物分子，晾干后即可得到双巯基化合物分子层修饰的金电极。 　　3.双巯基化合物结合纳米金的修饰 　　将组装了双巯基化合物的金电极浸入装有纳米金溶液微型塑料小试管中，置于低温环境下，并且将此装置与周围环境隔离。浸泡大概6小时后，取出用二次蒸馏水清洗干净，再在水中超声10秒，除去物理吸附的纳米