两种bt毒蛋白小地老虎的毒力差异及作用机理的研究.pdfVIP

摘要 摘要 苏云金芽孢杆菌是目前研究最深入、使用最广泛的杀虫微生物。小地老虎是世界性农 业害虫，取食广泛，具有迁飞性，所以对小地老虎的生物防治也非常重要。随着昆虫对Bt 抗性问题的出现，Bt对昆虫的作用机理以及昆虫对Bt的抗性机制是目前研究的热点。本 论文是以小地老虎为实验试虫，研究苏云金芽孢杆菌Bt Cry2Ab对昆虫的作 CrylAc和Bt 用，为更好的了解Bt对小地老虎的作用机制问题奠定了理论基础。 通过研究明确了以下问题： 1 Bt Cry2Ab毒蛋白对小地老虎毒性较高，相比较而言BtCrylAc对小地老虎毒性很低。 2Bt毒素对小地老虎生长发育影响明显。小地老虎初孵幼虫接入含有亚致死剂量毒蛋 白的人工饲料后，幼虫存活率、虫体重、化蛹率、蛹重和羽化率降低，幼虫历期和蛹历期 延长。BtCD，2Ab对小地老虎幼虫生长发育的抑制作用明显。说明BtCry2Ab对小地老虎 有毒性。 3取食不同Bt毒素后，小地老虎五龄幼虫体内中肠主要蛋白酶活力都发生了不同程度 的变化。取食含有Bt Cry2Ab毒蛋白饲料的幼虫体内，中肠总蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶与 对照相比活性升高；在Bt Cry2Ab毒蛋白含量达到121．Lg／g时，中肠氨肽酶活性显著升高。 取食含有Bt CrylAc毒蛋白饲料的幼虫体内，中肠蛋白酶活性没有升高。小地老虎和棉铃 虫幼虫取食含有Bt Cry2Ab毒蛋白饲料后，小地老虎幼虫体内谷胱甘肽．S．转移酶活性升高， 并且要高于棉铃虫幼虫体内酶活性。 4在处理时间相同的条件下，小地老虎中肠消化液蛋白酶活性比棉铃虫中肠消化液 高；在37℃条件下，棉铃虫中肠消化液将130kD的Bt CrylAc原毒素酶解为60kD的毒素， 并且稳定时间较长。而小地老虎中肠消化液对Bt CrylAc原毒素酶解作用，除得到60kD 的毒素外，在超过一定时间的条件下，还得到了40kD和分子量更小的蛋白。 受体基因测序的碱基序列长1136bp，与GenBank中公布的家蚕、玉米螟、舞毒蛾、棉铃虫、 烟芽夜蛾、烟草夜蛾的相似性分别达到64％、64％、63％、65％、67％、64％。小地老虎 Cadherin与其他鳞翅目昆虫的Cadherin具有较高的同源性，从兼并引物的设计就可以看出， 蛾、棉铃虫、烟芽夜蛾、烟草夜蛾的相似性分别达到63％、62％、64％、65％、63％、63％。 关键词：小地老虎；苏云金芽孢杆菌；中肠蛋白酶活性；类Cadherin基因 Abatract 皇曼曼m．m．-mm 量曼曼寰曼曼曼曼曼舅舅曼曼曼曼暑舅曼曼曼曼鼍鼍曼曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼曼曼曼曼量曼曼曼 two andmechanismsof onthe difference Study toxicity Bt in proteinsAgrotisypsilon Abstract the insecticideinthefieldof contr01． Bacillus most important biological thuringiensis(Bt)is