生姜原生质体培与体细胞变异.pdf

中国农业大学博士论文 摘要 摘要 Rosc．)是姜科、姜属能形成根状茎的一个栽培种。广泛分布于亚洲 生姜(Zingiber．officinale 热带、亚热带地区，在南非、北美和澳大利亚也有栽培，是集调味品、食品加工原料和药用为一 体的高效多用途蔬菜。生姜以根状茎作为繁殖材料，繁殖系数低，容易通过种姜传播病害，而且 长期无性繁造成种性退化。由于姜很少开花结籽，因此无法通过有性杂交手段进行种质创新和品 种改蘸。本论文以河南鲁山县张良姜、陕西城固黄姜、湖北枣阳生姜、四川竹根姜为试材，建立 了生姜胚性愈伤组织诱导和植株再生体系、胚性悬浮系再生体系，获得了原生质体再生植株，分 析了离体培养过程中的体细胞变异情况。获得如下结果： 1以各生姜地方品种的茎尖组织为材料，诱导产生了胚性愈伤组织，建立了高频再生体系。筛 性愈伤组织形成和再分化有较大影响。蔗糖比葡萄糖更利于根状茎的诱导，活性炭对根状茎诱导 役有明显作用。不同品种间胚性愈伤组织诱导、愈伤组织再分化以及植株再生能力存在一定的差 异。 2以胚性愈伤组织为材料，建立了胚性细胞悬浮系，并获得了再生植株。结果表明悬浮细胞 干重和pH之间有一定的相关性。接种量和AgNOa含量对悬浮细胞的生长都有影响：最佳接种量为 1．0％，最适AgNoa浓度为6．Omg·L-1。不同品种间胚性细胞悬浮系的生长能力不同。悬浮系愈伤组 织的分化能力低于其对应的胚性愈伤组织分化能力。 3利用生姜胚性细胞悬浮系成功分离得到原生质体，获得Sc姜荐生植株。酶种类和浓度、渗 透压调节剂种类和浓度对分离原生质体有重要影响，最佳酶液组成为4．O％纤维素酶、1．o，6离析酶、 活力为90．7％。悬浮培养时间对分离原生质的产量和活力有影响。葡萄糖比蔗糖更利于纯化后原 间在原生质体分裂、愈伤组织分化、植株再生方面有显著差异。 4对各品种生姜的胚性愈伤组织再生植株、胚性悬浮系再生植株、原生质体再生植株进行形 态学、细胞学、分子生物学鉴定。结果表明，再生植株外部形态没有明显变异。再生植株的染色 体数目没有变异。I{APD多态性分析表明，再生植株存在较广泛的体细胞变异。对各品种胚性愈伤 组织、胚性悬浮系愈伤组织、原生质体再生愈伤组织进行细胞学鉴定和RAPD分析表明，愈伤组织 的体细胞变异率远远高于再生植株的体细胞变异率。继代次数对体细胞变异率也有影响，随着继 代时间的延长，体细胞变异率有上升趋势。 关键词：生姜原生质体体细胞胚悬浮培养再生植株体细胞变异 中国农业大学博士论文 摘受 Abstract acultivar ofthe rhizomes Ginger(Zingiberofficma缸Rose．)isproducing familyZingiberaceae．It and and ismostlydistributedintheAsiantropicalsubtropics asa Australiaalso arerichinvolatileoilsand used plantgingers．Gingers widely condiments，dyes， withlow and themselvesrhizomes beverage，medicinevegetable．Gingersannuallypropagate by are attackedsoil-b