稻瘟病菌f-bx基因缺失突变体构建及生物学表型分析.pdfVIP

摘 要 稻瘟病菌 （Magnaporthe oryzae）是水稻生产上最具破坏性的致病真菌之一，严 重威胁着水稻的安全生产。近年来，随着稻瘟病菌全基因组数据的公布，加速了人 们对其致病相关基因的挖掘进程；同时也使得它与水稻的互作研究成为探索寄主与 植物病原真菌互作机制的理想模式之一。从分子水平解析稻瘟病菌的生长发育过程 及致病分子机制，对有效控制病害发生及促进水稻安全生产和提高品质具有重要的 科学意义。 本文采用啤酒酵母菌 （Saccharomyces cerevisiae）F­box 蛋白的氨基酸序列，对 稻瘟病菌全基因组数据库进行  Blast_p  分析，获得一个与之同源的蛋白编码基因  MGG_06351.6，命名为 Mofbox。序列分析发现，该基因编码的蛋白氨基端有一个典 型的 F­box 结构域，羧基端存在一个核定位信号 （KTKR） 。采用同源重组方法，构 建基因敲除载体并转化野生型菌株 Guy11，获得 2个基因缺失突变体。研究表明， 缺失 Mofbox 后，可使稻瘟病菌生长速率较 Guy11 菌株下降 10.0%左右，敲除突变 体对 NaCl、SDS 和 H O 的耐受性分别减弱 5.0%、6.0%  和 17.0%，但对 CFW 和  2 2  CR 的耐受性分别增加 2.5%  和 4.1%；M ofbox 突变体产分生孢子的能力较 Guy11菌 株分别显著下降  55.0%  和  52.0%；Mofbox  突变体对四棱大麦和水稻 （敏感品种  CO­39）的致病性显著降低。进一步研究发现，突变体分生孢子在疏水界面上形成 附着胞的能力较Guy11菌株显著降低，且膨压下降；洋葱表皮侵染试验亦表明，野 生型菌株和突变体菌株形成的附着胞均可穿透洋葱细胞壁，但与野生型菌株 Guy11  相比，突变体的穿透率降低 38.0%；同时，突变体侵入后形成的侵染菌丝不能在洋 葱表皮细胞中扩展；在突变体中，与附着胞形成相关的基因 Rho3、MST11、MST50、  PMK1 和 MPG1转录水平较野生型菌株也显著下降。 综上所述，Mofbox 在稻瘟病菌菌丝生长速率、产孢能力、对外源氧化压力耐 受性、细胞壁完整性、附着胞形成及致病性等方面具有重要的调控作用。 关键词：稻瘟病菌；Mofbox 突变体；附着胞；致病性 I  Abstract  The  filamentous  ascomycete  fungus  Magnaporthe  oryzae  is  one  of  the  most  destructive phytopathogen of rice plants, which severelythreats the rice yield worldwide.  Recently, the identification of the pathogenitic gene was accelerated due to the release of  the fungus genome, and the investigation of interactions mechanism between the fungus  and  the  rice  plants  makes  it  serve  as  an  ideal  model  for  studying  molecular  plant­pathogen  interactions.  In  addition,  understanding  the  fungus  development  and  pathogenesis ofM. oryzae on molecular level is a prerequisite to provide novel strategies  for disease management and rice qualityenhancement.  We characterized an F­box protein Mofbox, a homolog of F­box in Saccharomyces  cerevisiae  in M. oryzae.  T