脂肪酶产生菌的育及其固定化研究.pdf

摘要 摘要 生物柴油是生物质能的一种形式，具有绿色、可再生、能耗低等特点，能 够缓解石油即将枯竭和环境污染对人类造成的危机，成为国内外重点研究歹F发 的热点。 本文主要进行以下方面的研究： (1)产脂肪酶菌株的分离筛选和初步鉴定。从含油土壤中分离微生物，通 过油脂同化培养基平板筛选到一株产脂肪酶菌株。根据微生物分类学方法筛选 Link)，命名为GeotrichumCandidumNS3， 菌株初步鉴定为地霉属(Geotrichum cell。 摇瓶发酵初始水解酶活为321 drycell、合成酶活为o．18u／gdry tJ／g CandidumNS3为出发菌 (2)筛选菌株的诱变和稳定性检测。以Geotrichum 株，进行了常规的紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)的诱变。经过几轮的处理 cell的突变 和筛选，得到了一株水解酶活490U／gcell，合成酶活0．35tJ／gdry dry Candidum 菌，突变株命名为GeotrichumNS3T3。经过5次连续传代和发酵检测， 其代谢酶活和遗传性能稳定。 CandidumNS3T3的固定化研究。以聚氨酯泡沫为载 (3)筛选菌Geotrichum CandidumNS3T3细胞进行固定化条件实验研究，经过 体对产脂肪酶Geotrichum 显示，其优化的固定化条件为：聚氨酯泡沫颗粒尺寸6×6×6mm，密度27kg／m3， 固定培养60小时，有73．8％的细胞进入聚氨酯泡沫中生长固定，载体固定细胞 CandidumNS3T3 干重达到2．329／g载体。固定化颗粒电镜图片显示，Geotrichum 菌丝在载体孔隙内和脊壁上缠绕充盈，生长良好，固定结构稳定。固定化细胞 连续催化反应表现出较好的操作稳定性和酶活保持率。通过单因素比较实验对 GeotrichumCa玎didum NS3T3发酵培养条件进行了优化。结果显示：在接种量12％， Candidum cell。以固定化Geotrichum 力较高，培养菌丝合成酶活达0．54U／gdry NS3T3细胞颗粒作为催化剂，采用填充床(PBR)反应模式来进行催化反应， 薄层色谱法定性跟踪监测脂肪酸甲酯的生成，实验结果显示，固定化Geotrichum Candidum NS3T3能有效催化桐籽油合成生物柴油。 Valida T2)细胞的固 (4)聚氨酯泡沫固定产脂肪酶粗状假丝酵母(Candida 定化研究。通过对聚氨酯泡沫颗粒密度和粒径筛选、酸碱处理、以及固定化培 Il 摘要 ValidaT2细胞干重达到 养中的固液比优化，聚氨酯泡沫载体固定Candida