脂肽生物表面活剂的发酵生产及其结构、性质研究.pdf

中文摘要 生物表面活性剂主要是由微生物产生的天然表面活性化合物，生物表面活性剂可分 为六大类：糖腊类、脂肽，脂蛋白类、磷脂类、脂多糖-蛋白复合物、取代脂肪酸和中性黯 等。随着现代生物技术的迅猛发展以及生物表面活性剂在环保、石油开采、制药、食品加 工等方面的潜在应用价值的研究，已引起人们对在工业规模上用生物技术生产表面活性剂 的强烈兴趣。生物表面活性剂与化学合成表面活性剂性能相似，具有降低表面张力、稳定 乳化液和发泡等功能。但相比之下，还有其自身的许多优势：可生物降解，不会造成再污 染：无毒或低毒：一股不致敏、可消化，因此可用于化妆品和食品的添加剂；可以从工业 废物中生产，用于生物环境治理；具有更好的环境相容性，更高的起泡性，在极端温度、 DH、盐浓度下的更好选择性和专一性：结构多样，有可能适用于特殊领域。由于这些显 著特点，生物表面活性剂的研究日益增多，而且应用也越来越广泛。 在各种生物表面活性剂中，脂肽生物表面活性剂，园为它的高表面活性和在医药方面 的潜能尤其引人关注。它们不仅是一种非常有效的生物表面活性剂，也是～种血纤维蛋白 凝结和环AMP磷酸二酯酶的抑制剂，而且它们大多具有抗生素活性。本论文主要从脂肽 生物表面活性剂产生菌的筛选方法、菌种鉴定、高产菌株的诱变选育、发酵条件的优化、 腊肽的理化性质及其对原油的作用，以及脂肽的提取、组分纯化和结构组成分析等方面作 了较全面的研究，为其工业化生产和应用奠定理论基础。主要研究结论如下： (I)从220个采自大庆油田和胜利油田的油土样和油水样中，经过富集培养，血平板 和油平板分离，初步分离出了1650余株能够产生生物表面活性剂的菌株。经液滴坍塌法、 排油活性法和表面张力法进一步复筛，从中筛选出了8株产生物表面活性剂的优良菌株。 经过薄层层析(TLC)和红外光谱(FT-IR)分析鉴定．有4株菌产脂肽表面活性剂，其中芽 孢杆菌属的SD59菌株最好，其表面活性剂可以把培养基的表面张力降到31．0mN／m，而 且具有良好的乳化活性。 rRNA 对筛选出的SD59菌株又进行了系统鉴定，通过形态观察、生理生化实验和16S 同源序列比对和进化树分析，发现SD59菌株与芽孢杆菌属的地衣芽孢杆菌有98％以上的 IV SD59)。 相似性，所以，鉴定该菌株为一株地衣芽孢杆菌(Bacilluslichenformis (2)对筛选出的产脂肽生物表面活性剂的优良菌株SD59的摇瓶发酵产脂肽的特性进 行了研究。通过混合正交实验和单因素实验等方法研究了各种营养和环境因素对菌株 SD59发酵生产脂肽表面活性剂的影响。结果表明，无机氮源比有机氮源更有利于脂肽表 面活性荆的产生：提高培养基的C／N比有利于腊肽的合成和积累：脂肽的生产对培养基 溶氧要求不高。优化后的SD59产脂肽的培养基组成(g／L)为：可溶性淀粉20．0，硝酸 铵6．0，硫酸镁0．3，氯化钙0．08，酵母粉0,6，磷酸氢二钠8．0，磷酸二氢钾2．0，初始DH 7．2；最佳培养条件为；500 mL三角瓶的装液量为200 mL，接种量5．O％，培养温度36～ 38C。在此发酵条件下，脂肽表面活性剂的产量可达到1．2 g／L以上。 为了进一步提高脂肽的产量，对出发菌株SD59进行了紫外线、微波辐照以及硫酸二 乙酗(DES)连续复合诱变处理6代，经过初筛和复筛，从中获得了一株突变株SD596， 其脂肽产量较原始出发菌株SD59提高了181％，脂肽产量达到了3．445 g，L，已接近目前 的国内外研究的最好水平。经传代测定该菌株的遗传稳定性很好，可以用于生产。高产突 变菌株SD596所产的生物表面活性剂．具有很好的表面活性，提取纯化后的生物表面活 性剂经TLC和FT-IR分析测定，其生物表面活性剂的种类与原始出发菌株的相同。突变 株SD596产脂肽生物表面活性剂的水平