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洋葱ft同源基的克隆与表达分析
目 录
目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………………I
英文摘要………………………………………………………………………………………．III
1前言…………………………………………………………………………………………………………………………．1
1．1本研究的目的与意义……………………………………………………………………．1
1．2国内外研究进展…………………………………………………………………………．1
1．2．1植物成花机理及花发育研究进展……………………………………………………．1
1．2．2刀基因的研究进展……………………………………………………………………7
1．3研究发展趋势……………………………………………………………………………11
1．4总技术路线………………………………………………………………………………12
2材料与方法…………………………………………………………………………………．13
2．1试验材料………………………………………………………………………………．．13
2．1．1植物材料……………………………………………………………………………13
2．1．2供试菌株及载体……………………………………………………………………．13
2．1．3主要试剂及试剂盒…………………………………………………………………．13
2．1．4供试软件……………………………………………………………………………14
2．1．5主要试验仪器………………………………………………………………………．14
2．1．6引物……………………………………………………………………………………………………………．14
2．2试验方法………………………………………………………………………………．．15
2．2．1洋葱总RNA的提取…………………………………………………………………15
2．2．2
eDNA模板的合成…………………………………………………………………．16
2．2．3引物设计与保守区的克隆…………………………………………………………．．17
2．2．4
F丁的3’末端序列的扩增……………………………………………………………20
2．2．5刀的5’末端序列的扩增……………：………………………………………………22
2．2．6洋葱Fr基因开放读码框的克隆方法………………………………………………25
2．2．7
Fr基因DNA的克隆………………………………………………………………．25
2．2．8洋葱刀基因的时空表达……………………………………………………………26
2．2．9序列的生物信息学分析……………………………………………………………．．27
3结果与分析…………………………………………………………………………………．28
3．1洋葱总RNA的提取……………………………………………………………………．28
3．2eDNA模板的合成………………………………………………………………………28
3．3洋葱刀全长基因的克隆………………………………………………………………．29
3．4洋葱4个刀基因的比对………………………………………………………………．31
3．5洋葱刀同源基因的生物信息学分析…………………………………………………．．35
东北农业大学农学硕士学位论文
3．5．2洋葱AcLFT的生物信息学分析……………………………………………………36
3．6洋葱FT氨基酸序列同源性分析………………………………………………………．．37
3．7洋葱F丁同源基因系统进化树的构建…………………………………………………．．39
4讨论………………………………………………………………………………………………………………………．．43
4．1关于洋葱总RNA的提取…………………………………………………………………43
4．2关于PCR反应条件的优化……………………………………………………：………～43
4．3关于洋葱刀基因的实时表达分析……………………………………………………．．44
4．4洋
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