甲嘧磺隆的微生降解作用研究.pdfVIP

摘要 利用生物修复法来降低环境中的农药是行之有效的措旋之一，在诸多的农药生物 修复方法中以微生物修复的研究和应用最为广泛，尤其微生物修复环境中长残效农药 的研究较多。甲嘧磺隆是一种超高效、广谱、持效期长的磺酰脲类除草剂，在世界范 围内广泛应用于林业及非耕地杂草的防除。甲嘧磺隆性质稳定、不易降解、在环境中 持效期长，因此对敏感作物很容易造成药害。甲嘧磺隆的水溶性较高，在土壤中的移 动性较强，易造成对地下水的污染，因此，对甲嘧磺隆微生物降解作用的研究具有一 定的实践意义。而关于甲嘧磺隆的微生物降解作用研究鲜见报道，本研究通过富集培 养的方法从土壤和水中分离筛选出19株可降解甲嘧磺隆的微生物，对其中降解能力 较强的JH2和JH3菌株进行了降解特性及降解机理研究，主要研究结果如下： 1．降解甲嘧磺隆微生物的筛选。利用富集培养技术从生产甲嘧磺隆农药厂的废 水中分离得到了19株能够降解甲嘧磺隆的微生物，通过测定不同菌株对甲嘧磺隆的 降解率发现：供试菌株对低浓度甲嘧磺隆的降解率要显著高于高浓度的降解率，在培 养基中甲嘧磺隆的含量为5 睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas subsp)；JHl0菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus (BacillUS 株为枯草芽孢杆菌(Bacillus sp．)。 培养基为基础培养基III，以甲嘧磺隆浓度为5 mg·L‘1时JH2、JH3菌株降解率最高； JH2菌株对甲嘧磺隆降解的适宜温度为300(2，JH2菌株接种量为l×108CFU·mL～， 转速为150r·min-1，培养120 h对甲嘧磺隆的降解率最高：JH3菌株对甲嘧磺隆降解 7 的适宜温度为35℃，接种量为1×10CFU·mL～，转速为150r·min～，培养72h时对 甲嘧磺隆的降解率最高；通过对JH2、JH3菌株进行作用机理研究，两菌株降解产物 物，其紫外检测的保留时间为3．0min，推断甲嘧磺隆结构式中的另一半结构可能降 解为链状烷烃，没有紫外吸收，也不能离子化，因此没有特征峰。以此判断JH2、JH3 对甲嘧磺隆降解的作用位点在S-N键。 表达试验表明，两菌株的胞内酶和胞外酶均有活性，降解甲嘧磺隆的关键酶都主要是 胞外酶且降解酶诱导表达。在LB液体培养基中，当甲嘧磺隆浓度为5 mg·L～、接种 量为2．3x108 r·min～、培养时 CFU·mL～、初始pH值为8．O、温度30℃、转速为150 间120h时JH2菌株胞外粗酶的酶比活最高达到85．8 U·mg～；其酶促反应体系的甲嘧 磺隆最适浓度为5 大为86．9％。在LB液体培养基中，当甲嘧磺隆浓度为5 r·min一、培养时间72h时JH3 CFU·mL～、初始pH值为9．0、温度35℃、转速为150 菌株胞矫粗酶麴酶眈活最高达到88．4 U·mg1；酶促反应体系的甲嘧磺隆最适浓度为 5mg·L一、温度35℃、pH值为9．0时胞外酶对甲嘧磺隆的降解率最大为91．3％。两菌 株学噻磺隆降解酶在25℃～钙℃范圈内热稳定牲较好，趟值为7～9碱性条件下麓 够保持较高降解活性。 4。JH2、JH3菌株降鳃甲瞳磺隆活性酶的纯化。胞外粗蛋囱经过DEAE SepHarose Fast Flow溺离子交换柱分离，在280nm下JH2菌株得到5个蛋盘吸收蜂，降解圈法 检测发现3个洗脱峰P1．1、P1．3、P1．5均有降解活性；JH3菌株得到2个蛋臼吸收峰， kDa、32kDa、15