番茄内生细菌e-28对番茄灰霉病菌抑制作用研究.pdfVIP

摘要 本研究首先以黄瓜子叶法为基础，以化学药剂为材料，建立番茄灰霉病药剂筛选 体系，分别从不同黄瓜品种、不同叶龄、不同菌龄、不同培养条件、不同施药方法等 方面进行测试，针对灰霉病菌建立了简便、快速的杀菌剂生测方法。该体系可概括为： cinerea 黄瓜选用对BotrytisPers．中等感病品种长春密刺，叶龄为8d左右，菌龄ld的幼 龄菌丝，喷雾法施药，0．5％水琼脂保湿，24℃光照培养，接种后24～36hN量结果。 应用此法首先测试了4种化学药剂，2％恩泽霉水剂、25％菌思奇乳油、50％速克灵可 湿性粉剂和40％施佳乐悬浮剂对番茄灰霉病的防治效果，检验了测试体系的稳定性， 在此基础上，利用该体系从3株植物内生菌中筛选到一株对灰霉病菌有强烈抑制作用 的菌株Eb．28菌株，该菌株由番茄茎分离获得。 对Eb．28菌株培养条件的研究表明，培养温度、培养时间、培养基的酸碱度以及 通气量对菌株生长都有影响，确定其最佳培养条件为：30℃下培养时间为48h，初始 mL／250mL。 pH值为6．0，通气量为175 采用常规方法结合分子生物学方法对Eb．28菌株进行了鉴定。根据Eb．28菌株的形 态特征、培养性状以及生理生化反应，结合伯杰氏细菌鉴定手册(第八版)，初步将 此菌株鉴定为芽孢杆菌属。16S rDNA序列与枯草 rDNA序列分析表明Eb．28菌株的16S subtilis)。 芽孢杆菌同源性为99％，最终鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus 1．68％。 本研究表明，Eb．28菌株在离体叶片上对番茄灰霉病病斑扩展抑制率为5 该菌株的发酵滤液对灰霉病菌抑菌圈直径达到20mill以上，经121℃灭菌的滤液则无 抑菌圈产生，说明发酵液中的活性成分在121℃灭菌后失活。显微观察发现，发酵液 中活性物质可造成病原菌菌丝体原生质凝结，菌丝体畸形，不正常膨大。内生菌Eb．28 最高，抑菌圈直径达25mm。且上清液无活性，可见活性物质均已被沉淀，为蛋白类 物质。显微观察发现，抑菌圈周围受抑制菌丝畸形，原生质凝结，与发酵滤液对菌丝 的影响一致。进一步研究发现，此粗蛋白抑菌活性在近中性至碱性条件下(pH值 6．6～10．6)抑菌圈直径均达到20 mlTl以上，pH值在6．6以下粗蛋白抑菌活性显著降低。 粗蛋白经40，60，80℃处理后，抑菌活性与4℃对照无显著差异，其抑菌圈直径均在 20 mm以上。100℃处理20min后粗蛋白抑菌活性与对照相比显著下降，抑菌圈直径 mm。 为16mm。经紫外线处理12h后，抑菌活性与对照相同，抑菌圈直径均为21 结果表明，粗蛋白在80℃以下有很好的热稳定性，在100℃时稳定性下降，且此粗蛋 白在紫外光下稳定性良好。 关键词：番茄灰霉病；子叶筛选法；内生细菌；抗菌蛋白 effectof bacteriaEb一28fromtomatoon Inhibitoryendophytic cinereaPers Botrytis Author：Jiao Yan—ling Adviser：ProfessorCao Ke-qiang AssociateProfessor