燕麦中β-葡聚的化学结构、溶液行为及降血糖作用的机制研究.pdf

燕麦13一葡聚糖的化学结构、溶液行为 及降血糖作用的机制研究 摘要 燕麦B．葡聚糖以其多种生理活性而引起人们的关注，近期研究发现多糖的 高级结构、溶液中的聚集行为对其生物活性和药理作用的影响更为重要。本文 拟以我国产燕麦为研究对象，在系统研究燕麦B．葡聚糖定量测定方法，分离纯 化，理化特性和一级结构的基础上，利用原子力显微镜、激光扫描共聚焦显微 镜、动态激光光散射和圆二色谱等生物大分子和高分子物理的近代最新技术和 现代分离、分析手段与药理实验方法，着重探讨和表征了燕麦B．葡聚糖分子的 链形态、聚集态结构、溶液行为和三维链构象，较为系统的研究了B．葡聚糖的 降血糖作用及其机制，试图揭示多糖的立体构象和溶液中的聚集态结构与其生 物活性的关系，探讨可借鉴的思路和方法。 主要研究结果如下： 1．燕麦13．葡聚糖定量测定方法的研究 针对目前8．葡聚糖测定方法的不足之处，对现有荧光分析测定法进行了改 进。以荧光增白剂Calcofluor为荧光探针，在荧光光度计上测定B一葡聚糖和 g／mL， 420nm，溶液pHl0，避光反应5min。该方法测定的线性范围8．O～46．0u r=O．997， pH在7～12范围，盐离子浓度为1％～3％，单糖、淀粉和蛋白质存在对燕麦B． 葡聚糖测定均无影响。在此基础上，采用改进的方法，首次测定了我国主要燕 麦产区的8个燕麦品种中B．葡聚糖的含量和分布，结果表明，B一葡聚糖在燕麦 种中总B．葡聚糖含量范围为2．68％～3．87％，其中水溶性13．葡聚糖占主要部分， 仅有少部分是水难溶性B．葡聚糖。 2．燕麦B．葡聚糖的分离纯化与一级结构表征 以水作提取溶剂，经多次沉淀和多次柱层析分离纯化得到燕麦B．葡聚糖的 相对均一级分Oglu．1。通过纸层析、高效液相色谱、紫外光谱、红外光谱、核 磁共振氢谱和碳谱分析，证实该多糖为B．D．均聚线型葡聚糖，糖基之间通过B ．D．(1—3)和(1—4)糖苷键连接，二者之比为2．1：1。激光光散射测定多糖 的重均相对分子质量为4．49×105。 VI 3．燕麦13-葡聚糖溶液行为和聚集态结构研究 利用动态激光光散射、原子力显微镜、圆二色谱、激光粒度分析、x．射线 衍射技术、扫描电镜观察和DSC等现代分析手段较系统的研究了燕麦B．葡聚糖 Oglu-1的分子链形态、溶液构象，并首次通过专一性荧光增白剂与p．葡聚糖结 合，在激光扫描共聚焦显微镜下直接观察了燕麦B．葡聚糖在溶液中的三维聚集 5蛄， 可见燕麦葡聚糖在溶液中以半柔顺性线型链存在，随后建立的均方根旋转半径． 相对分子质量关系模型也进一步证实了Oglu．1分子在溶液中的形态为半柔顺性 线型高分子链。研究表明，溶液的pH、尿素、DMSO、荧光染料、温度等外界 环境因素及B．葡聚糖浓度、相对分子质量和多糖的结构均可改变其溶液状态下 的分子链构象、非对称性及分子间的聚集行为。原子力显微镜直接观察到了燕 糖分子的聚集。采用x．射线衍射、扫描电镜观察和DSC技术研究了燕麦B．葡 聚糖固体的结晶性能和热特性。研究表明，冷冻干燥制备得到的燕麦B-葡聚糖 固体中存在结晶区，x．射线衍射测定其结晶度为27％，DSC测定其放热峰的起 外目前尚未见文献报道。 4．燕麦13．葡聚糖流变学性能研究 在国内外学者初步研究的基础上，采用动态流变仪测定动态粘度和计算机 拟合牛顿幂律曲线方程的方法系统研究了燕麦B．葡聚糖的流体力学性能。结果 表明，当燕麦B．葡聚糖的浓度为0．1％、O．3％、O．5％和1％时，对应的流动指数 动性能具有从理想流体向假塑性流体变化的趋势，且葡聚糖相对分子质量越高、 剪切速率越低，则这种变化更为明显。环境因素如，温度、离子强度、pH、硼 砂和尿素等也影响B．葡聚糖溶液的流动性能。 在研究燕麦葡聚糖流动性能的基础上，还利用物性测定仪进一步研究了高 浓度状态下燕麦B．葡聚糖的凝胶特性。结果表明，燕麦13．葡聚糖凝胶结构的形 成受0．葡聚糖浓度和相对分子质量的影响，只有在燕麦13-葡聚糖相对分子质量 大于4．49×105、浓度高于5％的条件下时方