燕麦β-葡聚糖分子链结构及其体外活性.pdfVIP

摘要 燕麦B．葡聚糖是一种优质的水溶性膳食纤维，可以在水中形成粘稠的溶液而具 有降血脂和降低餐后血糖等生理活性。本研究采用了一种新的提取方法一冷冻凝胶 法得到了较高纯度的燕麦B．葡聚糖，并利用凝胶渗透色谱(GPC)、气相色谱(GC)、 傅立叶变换红外光谱(FTm)和核磁共振(NMR)等技术分析了燕麦B一葡聚糖的 分子结构，还借助于原子力显微镜(A刚)和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)等 新技术研究了燕麦p．葡聚糖的溶液行为。荧光探针CMcofluor可用来测定谷物和食 品中p一葡聚糖的含量，利用紫外光谱法研究了CMcofluor和B一葡聚糖之间的相互作 用力。从体外实验讨论了燕麦p．葡聚糖降血糖的可能原因，通过体外消化法研究了 燕麦B一葡聚糖对食物中碳水化合物消化速率的影响，以及燕麦p一葡聚糖对0【一淀粉酶 活性的抑制作用。鉴于燕麦p．葡聚糖主要在肠道中发挥其生理作用，利用Caco．2 细胞模型模拟肠道上皮细胞，尝试探讨了肠道细胞是否能吸收燕麦D一葡聚糖。主要 研究内容和结果如下： l、利用冷冻凝胶原理，提出了冻融凝胶制备燕麦B．葡聚糖新方法，其最佳条 件为：提取溶剂为水，料液比l：10，提取温度60oC，提取2次，每次提取1h，然 后将提取液浓缩至其中的p．葡聚糖浓度约为1％，反复冻融3次，冷冻干燥。产品 得率为1．4％，所得B．葡聚糖的纯度为85．6％。 105。将 2、纯化后的B．葡聚糖经GPC．LLs测定，其重均相对分子质量为1．52X 燕麦p．葡聚糖酸水解并衍生化之后用GC测定其单糖组成，结果表明该多糖仅含葡 萄糖。瓜图谱显示燕麦B一葡聚糖由p．D一吡喃型葡萄糖组成，由一维和二维NMR图 谱完全解析了燕麦B．葡聚糖的结构，证实其中的D．吡喃型葡萄糖是由D一(1_3)和 单个的状态出现，(1-÷4)／(1—3)键的比值大约为2．2。 3、利用AFM和LSCM，而不是高分子物理中常用的方法和技术，在不同尺度 层面重点研究了燕麦p一葡聚糖的溶液行为和在水溶液中形成的聚集体，证实了燕麦 B一葡聚糖樱状胶束结构的存在。经AFM观察，随着浓度逐渐由10“幽1lL上升至100 nm，截面高度3_5nm的圆形聚集体转变 ．grnL，燕麦B．葡聚糖逐渐由直径20-50 nm，宽度为300nm，长达3 成截面高度为20 gm的纤维状结构，体现了浓度效应 引起的多糖自组装过程，并显示出一临界浓度(100“gmL)，当低于此浓度时，多 糖聚集体随着浓度增加而变大，当浓度高于其临界值时，自组装聚集体则由原来的 圆球形变为了纤维状；而随着存放时间的延长，10“舢燕麦p一葡聚糖也可以自发 的在溶液中形成扁平的盘状聚集体结构，存放9天后这些圆盘状聚集体的直径约为 300 nm，高度介于15-20nm之间，可见，时间效应也使聚集体增大；而向Calcofluor nm。 nm增加至50-100 中加入B．葡聚糖时，颗粒的高度由¨0 利用荧光分子Calcofluor可以与燕麦D一葡聚糖特异性结合的性质，通过LSCM 在较大的尺度上观察了燕麦D．葡聚糖溶液经过冷冻和解冻之后形成的纤维状聚集体 结构，并观察到Calcofluor的荧光强度随着体系中燕麦B．葡聚糖浓度的上升而增加。 4、利用表面活性剂SDS将燕麦B．葡聚糖分散成了单个的分子，经AFM测量， 这些单分子的平均直径约为0．44nm，数均轮廓长度(厶1)和均方根末端距(Ree2“2) 分别为938和912 nm。以上数据与文献中的 nm，计算得到的持续长度(k)为526 光散射结果比较，二者十分接近，证实了AFM观测到的确实是单个的B一葡聚糖分 子。同时也直观的证实了前人提出的p．葡聚糖是一种无分支的线性多糖链。 5、利用紫外光谱法研究了燕麦B一葡聚糖与Calcofluor的分子间相互作用。测定 了两者在不同溶液环境中的结合常数(的，每个葡聚糖分子上的结合位点总数(