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耐热真菌纤维素基因的克隆与序列分析
I掣炒州必必
目录
中文摘要………………………………………………………………………………………．．I
AbstI鼍ct…………………………………………………………………………………………………………………．．IⅡ
l前言………………………………………………………………………………………………………………………．1
1．1高温真菌的研究进展……………………………………………………………………．1
1．1．1高温真菌的定义及分类………………………………………………………………。l
1．1．2高温真菌应用研究概况………………………………………………………………～l
1．2纤维素酶的研究进展……………………………………………………………………．2
1．2．1纤维素酶的组成………………………………………………………………………一3
1．2．2纤维素酶的结构………………………………………………………………………一3
1．2．3纤维素酶的特性………………………………………………………………………．．7
1．2．4纤维素酶的催化机理…………………………………………………………………一8
1．2．5产纤维素酶的微生物…………………………………………………………………10
1．2．6纤维素酶的基因克隆…………………………………………………………………10
1．2．7纤维素酶的应用………………………………………………………………………12
1．3选题的目的意义、研究内容和技术路线………………………………………………13
1．3．1目的意义……………………二………………………………………………………一13
1．3．2研究内容………………………………………………………………………………14
1．3．3技术路线………………………………………………………………………………14
2材料与方法………………………………………………………………………………一15
2．1材料…………………………………………………………………………………………………………………一15
2．1．1供试菌株………………………………………………………………………………l5
2．1．2实验所用载体……。…………………………………………………………………．15
2．1．3酶及生化试剂…………………………………………………………………………15
5
2．1．4仪器………………………………………………………………………………………………………………一l
2．1．5缓冲溶液………………………………………………………………………………15
2．1．6常用培养基……………………………………………………………………………．16
2．1．7引物序列………………………………………………………………………………16
2．2耐热真菌纤维素酶基因的克隆…………………………………………………………l8
2．2．1引物设计………………………………………………………………………………一18
2．2．2菌体培养………………………………………………………………………………23
2．2．3总砒叮A的提取(砌nzol法)………………………………………………………．23
2-2．4紫外检测m叮A产率和纯度…………………………………………………………．23
2．2．5cDNA第一链的合成…………………………………………………………………．23
2．2．6纤维素酶基因cDNA中间片段的分离………………………………………………24
2．2．7纤维素酶基因3’末端的分离…………………………………………………………．27
2．2．8纤维素酶基因5’末端的分离…………………………………………………………28
2-3纤维素酶基因全长序列比对和生物信息学分析………………………………………33
3结果与分析………………………………………………………………………………一34
3．1总RNA的提取…………………………………………………………………………34
3．2基因克隆…………………………………………………………………………………34
3．2．1瘤孢棒囊孢壳(CD，)冲尬蚴‘ss弓矽面拧如竹)第六家族纤维素酶基因
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