苏云金芽胞杆菌虫晶体蛋白cry1ca7分子设计.pdfVIP

摘 要 苏云金芽胞杆菌(Bt)是目前世界上应用范围最广的杀虫微生物，其杀虫活性主要来源于其 在芽胞形成过程中产生的杀虫晶体蛋白。杀虫晶体蛋白结构和作用机制是目前国内外Bt研究的 热点；在了解杀虫晶体蛋白结构与功能关系的基础上，可以通过分子设计来改变杀虫晶体蛋白的 活性和杀虫谱，为转基因植物或微生物提供新的基因来源。 本论文围绕苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白CrylCa7的同源建模、分子设计、突变蛋白的机理 变化等方面进行了一系列的研究，主要结果如下： 了表达，并对甜菜夜蛾进行了生物活性的测定。结果表明绝大部分突变毒蛋白活性降低了，位于 Domain 是F580S、R522E和R570G；只有位于Domain 性。D12．3a和D12．3b／c的活性完全丧失了。 生测结果发现，BtFl77S的活性与CrylCa相当，而BtF580S几乎完全丧失了活性。 与BBMV进行了竞争结合实验和寡聚化实验。通过竞争结合实验可以看出，两种突变蛋白的结 化。 将crylFa2全长基因连接在pSTK上，并转化了苏云金芽胞杆菌无晶体突变株，得到的 达到CrylCa7的1／12，而对棉铃虫的活性只达到CrylAc的1／10。 Bt杀虫晶体蛋白分子设计在Bt应用和杀虫作用的分子机理研究方面具有理论意义和实用价 值。通过对CrylCa7进行分子设计，获得了活性提高的突变蛋白，为转基因植物或微生物提供了 新的基因资源；活性降低的突变蛋白可以作为材料用来做机理方面的基础研究。 关键词 苏云金芽胞杆菌，杀虫晶体蛋白，定点突变，重叠引物PCR，CrylCa7 Abstract Bacillus isoneofthemost usedinsecticidal thuringiensis widely microorganism，Whosetoxicity fromtheinsecticidal researchesofthestructureofICPandthe originate crystalprotein(ICP)．ne mechanismoftoxinarethe intheworld．Baesedontherelationbetweenstructureand hotspots protein can thetoxinand the the ofmolecular function，weimprove changespecificityby way designing， new resourcesfor and therebyprovidinggenetic transgeneticmicroorganism． plant ne includesaseriesof the of study aspects：comparative modeling，moleculardesign，andchanges mechanismofmutants．Theoverallresultsareshowedbelow： receptorbinding the 13mutants extensivePCRwere were intheEcoil by over-lapping obtained．Theyexpressed andF177SarelocatedintheDomainI．1nhe showedR148Ghasan BL21(DE3)．R148G