杂色蛤ace抑活性肽的制备及分离纯化.pdfVIP

Thesis for the Degree of Master Perparation and purification of ACE inhibitory peptides from Ruditapes philippinarum Dissertation Submitted to Dalian Ocean University By Fu Jinxia Dissertation Supervisor: LiZhibo, Associate Professor June, 2015 摘要 摘 要 杂色蛤资源丰富，蛋白质含量高，研究表明，其提取物具有抗氧化、降血糖、抑菌等 多种生物活性。本论文以杂色蛤为原料，从杂色蛤血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽的制 备、分离纯化、大孔树脂脱腥工艺优化和相应的调味产品开发这四方面进行研究，主要研 究结果如下： (1)杂色蛤酶解制备ACE 抑制肽的工艺优化过程中，采用马尿酸法测定杂色蛤酶解产 物对ACE 酶的抑制率。以ACE 抑制率和水解度为指标，对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱 性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5 种蛋白酶对杂色蛤肉的酶解效果，筛选出木瓜蛋白 酶最佳。并通过单因素实验和正交实验对酶解工艺进行优化，得到最佳酶解工艺为：料液 比1 g:10 mL ，加酶量1.5 %，酶解温度45 ℃，酶解时间1.5 h ，pH 6.0 。所得酶解液的蛋白 水解度为27.75 %，浓度为2 mg/mL 和10 mg/mL 的酶解液的ACE 抑制率分别为18.5 %和 87.1 % 。 (2)采用超滤技术、Sephadex G-25 葡聚糖凝胶、DEAE Sepharose Fast Flow 阴离子交换 层析、Sephadex G-15 葡聚糖凝胶分离纯化酶解液中的ACE 抑制肽。通过活性跟踪分离所 得ACE 抑制肽在浓度为2 mg/mL 时，对ACE 酶的抑制率可达51.3 %，与酶解液相比活性 明显提高。抑制动力学研究表明，杂色蛤ACE 抑制肽对ACE 酶的抑制作用是非竞争性的。 经MALDI-TOF 质谱分析显示杂色蛤ACE 抑制肽的分子质量在1000 Da 以下，经红外光谱 分析，该抑制肽的结构中含有苯环官能团。 (3)选择7 种大孔树脂，以感官评定为指标，静态吸附和动态吸附两种方式对杂色蛤酶 解液进行脱腥效果的研究，从中选出最佳脱腥工艺为: AB-8 型号大孔树脂，静态吸附，大 孔树脂：酶解液 （体积比）=1:10 ，吸附温度35 ℃，吸附脱腥时间2 h ；动态吸附，大孔树 脂：酶解液=1:10 ，流速3 mL/min ，室温。当浓度为10 mg/mL 时，酶解液经静态吸附后的 ACE 抑制率为46.09 %，经动态吸附后的抑制率为52.1 %，比未脱腥前活性有所降低。 (4) 以脱腥后样品为原料，加入食盐、白砂糖、味精、柠檬酸等四种添加剂，以感官评 定为指标，研制杂色蛤 ACE 抑制肽调味料产品。通过单因素实验和正交实验确定最佳配 方工艺为：3 g 脱腥冻干的ACE 抑制肽加入100 mL 水中，食盐添加2 g、白砂糖8 g、味 精1.5 g、柠檬酸3 g 。并对产品进行ACE 抑制率的测定，调味料（多肽浓度10 mg/mL ） 的ACE 抑制率为47.0% 。 关键词:杂色蛤；ACE 抑制肽；酶解工艺；分离纯化；脱腥技术 Ⅰ Abstract Abstract Ruditapes philippinarum ，which is living around our coastal widel