桃pg酶基因启子克隆及序列分析.pdfVIP

摘 要 论文题目： 桃PG 酶基因启动子克隆及序列分析 专 业： 果树学 研 究 生： 郭国宁 指导教师： 杨英军 摘 要 桃是我国最古老的果树之一，属于蔷薇科（Rosaceae ）桃亚属（Amygdalus Prunus persica ( L.) Batsch. ）果树，生长遍及南北半球温带地区。其果实属于呼 吸跃变型，在发育与成熟过程中果实经历着色泽、质地、风味等一系列的深刻变 化，特别是在采后的后熟阶段，果实硬度下降很快，降低了果实的商品性能。 在桃果实后熟阶段多聚半乳糖醛酸酶（PG 酶）起主要作用，它可以使果实 的果胶物质降解、细胞壁结构破坏，导致果实快速软化。该酶的释放与表达是受 基因严格调控的，而启动子是基因表达调控的重要顺式元件，对基因表达与否以 及表达量的高低起着重要作用。延缓果实后熟、抑制PG 酶的表达，进而创造新 的种质，因此研究PG 基因的调控元件——启动子就具有了重要意义。 本研究的主要目的是克隆桃 PG 基因的启动子，对该启动子序列进行分析， 并在此基础上构建缺失表达载体，为下一步研究其功能奠定基础。 研究的主要内容为：比对已报道的桃 PG 基因序列，依据引物设计原则，设 计三条特异引物；通过改良CTAB 法提取DNA ；采用Tail-PCR 方法扩增并克隆 到桃PG 基因 5 ′端侧翼序列，并对该序列进行分析；登陆NCBI 进行 BLASTn 比对；序列提交GenBank 数据库； 扩增并克隆缺失片段，构建缺失表达载体。 研究结果表明克隆到的 986bp 序列 3 ′端与已报道的PG 酶基因序列的 5 ′ 端部分序列同源性为 96 ％，剩余5 ′端906bp 在 GenBank 中没有同源片段，表 明该片段为 PG 酶基因 5 ′端侧翼序列。递交数据库，登陆号为 FJ940722 。用 Neural Network Promoter Prediction 、PLACE 等软件对序列进行基础启动子、转 录起始位点、顺式作用元件和起始密码子等分析，发现在 789bp-839bp 位置存在 基础启动子序列，转录起始位点是位于 828 bp 的碱基C ，其可能性为0.98 ；序 列中含有丰富的顺式作用元件，除了具有基本的CAAT-BOX 和TATA-BOX 外， 还含有其他重要作用元件 GATA-BOX、 ARR1AT-BOX 、 POLLEN1LELAT52 、 ACGTATERD1 等。 在对该序列分析基础上，进一步设计引物，扩增得到含有该序列部分重要元 件的三个缺失片段；对片段进行回收，替代植物表达载体pBI121 中35S启动子， I 摘要 构建三个植物缺失表达载体。这对以后深入研究PG基因的调控等研究奠定了基 础。 关 键 词：PG 酶，启动子，克隆，序列分析 论文类型：基础研究 II Subject: Cloning and nucleotide sequence analyzing of the polygalacturonase gene promoter from peach Specialty: Pomology Name: Guo Guoning Supervisor: Yang Yingjun ABSTRACT Prunus