亚治疗剂量四环饲喂对牛源微生物耐药基因的影响.pdfVIP

摘 要 以低于治疗水平的氯四环素(CT) ，以及低于治疗水平的氯四环素和治疗水平的氧 四环素组合(CT-OX)两种方式分别对肉牛进行抗生素处理，研究其对肠道大肠杆菌耐 药基因型的影响。粪便样品采自商业肉牛饲养场，并有详实的抗生素使用历史记录， 通过抗菌药物纸片法和稀释法敏感性试验测试分离出的大肠杆菌对四环素、氧四环素 和氯四环素的敏感性。利用 tet(A) ，tet(B)和 tet(C)基因的引物进行多重 PCR 试验，检 测对四环素耐药或中介的细菌样品( 176 个) ，结果发现全部样品均携带一种或者两种 耐药基因，tet(A)在两组样品中的流行基本相同，但 CT 组中tet(B) 的流行比例较CT-OX 组小(P0.05) ，而 tet(C) 的流行比例则较大(P0.05) 。同时，在对四环素表现为中介的 样品(52 个)检测结果中，发现其中 92.3%呈现出携带 tet(C)基因。另外，最小抑菌浓 度值(MICs)结果表明，药物敏感性同时取决于四环素类别和耐药基因型两方面的因 素。利用 real-time PCR 在转录水平上分析 tet(C)基因，发现耐药型与中介型并非上游 调控造成。但是，对 tet(C)基因的测序分析发现耐药型的第 1063 处碱基由 T 突变为 G 。 由上述数据可以看出，对肉牛的四环素饲喂种类可以影响到大肠杆菌的耐药基因流 行。 将肉牛分为亚治疗剂量氯四环素的饲喂组及其对照组，在对其处理 60 天后进行 粪便与咽部分泌物样品的采集，且对另一部分肉牛进行饲喂前后同一动物的样品采 集，提取其宏基因组 DNA，研究其中四环素耐药基因、磺胺耐药基因和红霉素耐药 基因的浓度变化。结果表明，亚治疗剂量四环素的饲喂对 tet(B)基因浓度的影响是显 著的，四环素的存在的确对该基因的存在产生了选择压力；粪便中携带 tet(C)基因的 大肠杆菌数目较少，因此 tet(C)基因在粪便中的浓度相对较低；咽部分泌物中 tet(H) 基因浓度较高；四环素处理同样对 tet(M)、tet(O)和 tet(W)基因的选择压力也是明显的， 而粪便样品中这 4 类基因的浓度较高。对于磺胺耐药基因来说，sul2 基因在粪便样品 中表现出了较高的浓度。在红霉素耐药基因中，亚治疗剂量四环素的饲喂对 erm(A) 和 erm(X)基因的影响是较为显著的。 通过对肉牛给予低于治疗水平的不同种类抗生素，研究其对废弃粪便微生物群落 中四环素耐药基因数量与持久性的影响。试验肉牛被分成不同的抗生素处理组：氯四 环素组，氯四环素和磺胺甲嘧啶组，以及对照组。将每个围栏中所有动物的新鲜粪便 混匀为一份混合样品作为模式样品(每个处理组 3 份) ，分别在露天放置的第 7、14、 28 、42 、56、70、84、98、112、126 和 175 天时采样并提取 DNA，利用real-time PCR 方法测定四环素耐药基因 tet(B) ，tet(C) ，tet(L) ，tet(M) ，tet(W) 以及16S-rRNA 的浓度。 结果显示，16S-rRNA 的浓度在不同处理间相似，在 56 天内保持增加(P0.05) ；总体 上看，四环素组的耐药基因初始浓度较高(P0.05) ；所有处理组的tet(B)和 tet(C)浓度 到 56 天时均增长了 1～2 个对数级，到 175 天时又降低到初始水平，而 tet(M)与 tet(W) 的浓度与其他耐药基因相比较高。由此可见，四环素耐药基因可以在废弃粪便中持续 存在超过 175 天，而某些基因的最初数量可能会导致错估其后的变化，其浓度的暂时 改变并不能归因于微生物群落数量的变化。 关键词：肉牛；耐药基因；四环素；定量分析 Effect of Subtherapeutic Administration of Tetracyclines on Antibiotic Resistant Genes in Feedlot Cattle Abstract The effect of administering feedlot cattle subtherapeutic levels of chlortetracycline (CT) or CT and therapeutic levels of oxytetracycline (