克百威的elia试剂盒研制及多克隆抗体解毒功能研究.pdfVIP

摘要 本研究以2，3一二氢．2，2一甲基一7．苯并呋哺氯甲酸酯为基础合成了克百威的两种半 抗原， 用紫外光谱法测定克百威与载体蛋白结合物结合比。 ， ／用合成的克百威免疫原免疫兔子后获得高效价、高特异性的抗克百威多克隆抗血清， 、 所得克百威多抗血清与丁硫克百威的交叉反应率6．19％，与呋喃酚的交叉反应率为4．00 ％，与供试的其它5种氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于O．44％，对于￡种有机磷 辣根过氧化物酶偶联制备成酶标抗体，同时了测定了酶标抗体的活性，效价为l：4000。 在优化免疫学反应条件后，建立了克百威阳J接竞争ELISA法和直接竞争ELISA法， 10mg／L，并在此基础上研制了两种用于检测水、土壤、蔬菜、中毒样品的酶联免疫试剂 盒，其试剂盒的重现性好，批内批问及整体变异系数均低于8．O％，试剂盒检测的准确度 高，除呕吐物样品外．其余样品的回收率均在89．62％以上。 同时，根据抗体抗原的特异性结合反应的原理，进 步研究了抗克百威抗体对小鼠 克百威中毒后的解毒作用，试验结果表明，抗体可以较好地缓解克百威对乙酰胆碱酯酶 抑制作用的症状，使中毒小鼠逐渐恢复F常。 关键讯克乡7人工够’抗体’乩18秒氢节’解毒、／ ＼．／ v q 致 谢 本论文是在导师朱国念老师的悉心指导和关怀下完成的。从论文选题、实验研究到 论文写作无不凝聚着导师的心血。我衷心感谢导师多年来对我的精心培养。另外，也感 谢我的另一位导师，浙江省农业科学院的王强老师给予的关心和支持。 本研究是在本研究所吴银良、胡秀卿的研究基础上进行，实验中动物免疫是在浙江 中医学院陈民利老师、应华忠老师的帮助下完成的，浙江大学植物病理组章初龙老师和 浙江大学生物技术研究所孙守慧博士在抗体冻干粉和制备酶标抗体提供较多帮助，浙江 大学肿瘤研究所曹江老师为试剂盒的研制提供了宝贵意见，浙江省农药检定所楼正云在 克百威的液相色谱残留检测中提供了极大的帮助，本研究所李少南老师和谢显传同学为 本文的乙酶胆碱酯酶活性的测定给予了热心的帮助。本论文的工作也始终得到了本研究 所各位老师、同学和实验室工作人员的帮助，他们为本论文的顺利完成提供了热，心的指 导和无私的帮助，在此对他们表示深深的谢意。 此外，也要感谢多年来一直支持我求学的亲人，感谢他们多年来对我的支持、关心 和帮助。 在论文完成之际，谨向所有关心和支持我工作、学习、生活的老师、同学、朋友， 亲人表示衷心的感谢。同时向参加本文评阅、评议和答辩委员会的专家、教授和参与论 文答辩工作的人员致以诚挚的谢意。 杨 挺 2002年5月于杭州华家池 术语和缩略语表 缩略语 英文 中文 Ab Antibody 抗体 Ag Antigen 抗原 BFNB 4-{f(2，3-Dihydro-2，2·Dimethyl-7-benzofur4-{【(2，3·一氢-2，2-_二甲基一7 Acid 苯并呋喃基氧)羰基】氨基)J酸 anyloxy)carbonyl]-amino}butanoic BFNH 6-{【(2，3-_二氢一2，2-甲基一7 6-{【(2，3一Dihydro。2，2一Dimethyl-7一benzofu Acid -苯并呋喃基氧)羰基】氨基)己酸 ranyloxy)carbonyl]-amino}hexanoic al