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第十八章 经典液相色谱法 固定相：固体吸附剂 吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的比表面积，表面有许多吸附中心。 吸附是溶质在吸附剂表面的集中浓缩现象。 1. 硅胶（SiO2·H2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 1. 硅胶（SiO2·H2O） 2）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 洗脱作用 实质上是流动相分子与被分离的组分分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程。 （1）被测物质的结构与性质 （2）吸附剂的选择(活度) （3）流动相的选择 薄层色谱法（p469） 将固定相均匀地涂铺在玻璃板、铝箔或塑料板上形成薄层，点样后用展开剂（流动相）将其展开，然后将薄层板斑点定位后分析的方法。 薄层扫描仪 一、薄层色谱法的主要类型 四、定性参数（P463） 第三节 纸色谱法 将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、 定性、和定量的液-液分配色谱法 固定相：纸纤维吸附的水 流动相:与水不互溶的有机溶剂（水饱和正丁醇） 分离机制：液-液分配色谱，溶解度的不同 定性参数： * * 内容回顾 色谱分离原理： 利用物质在固定相与流动相之间的分配系数差异而实现分离。 概述 经典 液相 色谱 经典柱色谱法 平面色谱法 薄层色谱法 (TLC) Thin layer Chromatography 纸色谱法 Paper Chromatography 现代柱色谱法 经典柱色谱法 18.2 液－固吸附柱色谱法 18.2.1 分离原理 吸附色谱法的分离原理（P449） 吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的比表面积，表面有许多吸附中心。 流动相中 的溶质分子 在吸附剂上被吸 附的流动相分子 在吸附剂上被 吸附的溶质分子 吸附与竞争 吸附活性次序：活泼型游离型束缚型 二、常用吸附剂 1）吸水→失活 硅胶的活性与含水量有关，含水量高，活度级数高，吸附力弱。 b) 105～110℃烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 c）500℃烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 1. 硅胶（SiO2·H2O） 适用：分析酸性或中性物质 如有机酸、氨基酸、甾体。 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 18.2.3 色谱条件的选择 优化实验条件，使各组分分离： （1）试样的结构和性质 （2）吸附剂的选择(活度) （3）流动相的极性 洗脱作用 18.2.3 色谱条件的选择 物质极性 a. 基本母核相同，则分子中基团的极性越强，整个分子的极性也越强 b. 分子中双键越多，吸附能力越强，共轭双键多，吸附力也增强 极性相似相溶原理 分离极性大的组分，选用极性大的溶剂作为流动相； 分离极性小的组分，选用极性小的溶剂作为流动相; 吸附与竞争 吸附薄层色谱法 固定相－吸附剂 分配薄层色谱法 固定相－液体 吸附剂：硅胶(10~40um)、 氧化铝 硅胶H 硅胶G 硅胶HF254 硅胶GF254 三、平面色谱操作方法（p468） 制板 点样 展开 显色 分析 定时展开 定位 石油醚（60～90℃） -乙酸乙酯（9:1） 显色 有色物质：日光 有紫外吸收 或有荧光物质：紫外光 用荧光板 用显色剂 定位 1乙二醇 2丙三醇 3丁四醇 4糖醛酸 5甘露糖 6阿拉伯糖 7果糖 8半乳糖 9葡萄糖 10岩藻糖 11木糖 12鼠李糖 三、平面色谱操作方法 制板 点样 展开 显色 分析 定时展开 定性分析、定量分析 定位 定性分析 Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳） 1、比移值 2. 相对比移值Rr 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关， 范围可以大于或小于1 3 相平衡参数 （2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） 4 分离参数 三、平面色谱操作方法 制板 点样 展开 显色 分析 定时展开 定性分析、定量分析 定位 定性分析 洗脱法 直接定量法 取尿液5