广西巴马小型猪-1,3半乳糖转移酶基因过表达载体和rnai载体的构建及其沉默效率检测.pdfVIP

的构建及其沉默效率检测 摘要 因此，0【．13．半乳糖苷转移酶是异种器官移植中产生超急性免疫排斥 (hyperacute 基因的效率，本研究针对广西巴马小型猪O【．1，3GT基因，设计并构建了 默效率进行检测，为将来进一步获得0c．1，3GT基因沉默巴马小型猪，构建异 种器官移植用巴马小型猪模型奠定基础。 序。测序结果显示分别成功克隆得到了广西巴马小型猪缺失第五外显子 序列(GGTAl．2，11 1 pMD 用脂质体(Lipofectamine 经转染24h后，置于倒置显微镜下观察其在细胞中的表达情况。结果表明重 为下一步进行伐．1，3GT基因的沉默实验奠定基础。 RNAi技术在PK．15细胞中沉默该基因，并对其沉默效率进行了检测。首先， 2000与 与Westernblot对其进行沉默效率检测。荧光定量PCR结果显示， 1．3抑制效 I．2和pLLU2G．shGGTA pLLU2G．shGGTA1．1、pLLU2G．shGGTA 2000空白对照组一与空转染DMEM空白组二无抑制效果，阳性 lipofectamine blot检测结果表明， 对照组pDsRedl．GGTAl．1高表达GGTAl基因。Western 1-3这3个干 pLLU2G．shGGTA1．1、pLLU2G．shGGTA1．2和pLLU2G．shGGTA 扰实验组GGTAl蛋白几乎为痕量表达，这与荧光定量PCR检测结果一致。 2000空白对照组一与 GGTAl．1中GGTAl蛋白表达水平明显高于空白对照组。 型猪模型。 关键词：巴马小型猪0【一1，3半乳糖转移酶RNA干扰基因沉默 CONSTRUCTIONAND DETECTIONoF RNA INTERFERENCE VECTORSFOR SILENCING OVER-EXPRESSIONVECTORAND RNAi VECTOROF GENE FROM GI】．ANGⅪBAMLA．MINIPIG ABSTRACT isalsoknownastheGGTA Alpha。1，3-galactosyltransferasegene 1 gene． This for codesthe gene enzyme0【一1，3 galactosetransferase，which catalysis 0【一Gal